第章核酸的研究方法(精)

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1、第十五章核酸的研究方法第一节核酸的分离、提纯和定量测定一、DNA的分离用lmol/L的NaCl制备组织匀浆，离心除去组织残渣，多次用苯酚处理使蛋白质变性，每次处理后离心取上层水相，最后加2倍体积的乙醇沉淀出DNAo二、RNA的分离由于RNA酶存在广泛，fl.十分稳定，破碎细胞时要加入弧盐破坏RNA酶，试剂要用0.1%的DEPC（焦碳酸二乙酯）配制，器血要高压火菌或用0.1%的DEPC处理，多次用苯酚或氯仿处理使蛋白质变性，每次处理后离心取上层水和，mRNA可用寡聚dT•纤维素亲和层析从总RNA中分离。三、核

2、酸含量的测定法常用的方法是测定260nm的消光度，用公式计算核酸的含虽:。核酸的含量也可以用定磷法测定。DNA的含量可以川二苯胺显色法测定。RNA的含量可以用地衣酚显色法测定。Singlc-stranck^lDNAofdoublc-straiidcdDNASingk-strancicdDNAtobetcquciKcdOurdXTPhradioacthtrlv{dAITarrr曲d

3、ductsddATP"IE4rrariionmixturefirkITTPddAG.UTT

4、lAC-RrtulcIIIJ第二节核酸的超速离心及核酸的凝胶电泳一、核酸的超速离心超速离心可以分离超螺旋DNA（密度人），线性DNA（密度小）和闭环DNA（密度居屮）。也可以分离RNAo二、核酸的凝胶电泳从细菌抽捉得到的质粒DNA样品小不含线状DNA松迪怡OC,OpencircularDNA・・■・'SUPWCCXED■H趨螺陆CCCrco¥alent)y<]osedcircularDNAL2J第三节核酸的核昔酸序列测定Single*strandrdDNAATpolvmvfasc+3-OHdATParrpd

5、CTPdGTPTrtAnnealingofprimercreatesashortstretchofdotible-sinmdeclDNA■ioPrimer一、DNA的酶法（末端终止法）测序JJ"WTSingloitraruicclDNAtobeyqueixMPnnirrRrActionproducu•Iir-KiionmiKiurr^ddGAGACTddGCGAGACTdtlGATGCC.AGACT

6、ATGCGAGACTGelrirctrophorrMhandautnrarfiographvLargerfragnwnwRradiiig4q11rnrrbottomti)to卩：〜A—G~C・(AT—A—OC・Ikcnmplrinrnii、ihroriginalirrnphir%u

7、ntDkncilnlwHatrOII+H^COSCXH,II(>MriinLaxin-O—P=OT—FOaDV%fragmentHC=<)Thymic()*O—P=O*O—P=oI()PipcridinrQo—p—crIo*5r—P

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