第15章核酸的研究方法

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1、第十五章核酸的研究方法第一节核酸的分离、提纯和定量测定一、DNA的分离用lmol/L的NaCl制备组织匀浆，离心除去组织残渣，多次用苯酚处理使蛋口质变性，每次处理后离心取上层水相，最后加2倍体积的乙醇沉淀lliDNAo二、RNA的分离由于RNA酶存在广泛，冃十分稳定，破碎细胞时要加入弧盐破坏RNA酶，试剂要用0.1%的DEPC（焦碳酸二乙酯）配制，器川L要高压火菌或川0.1%的DEPC处理，多次川苯酚或氯仿处理使蛋口质变性，每次处理后离心取上层水相，mRNA可用寡聚dT-纤维素亲和层析从总RNA中分离。三、核酸含量的测定法常川的方法是测定2

2、60nm的消光度，川公式计算核酸的含暈。核酸的含量也可以用定磷法测定。DNA的含量可以用二苯胺显色法测定。RNA的含量可以用地衣酚显色法测定。Sitigle-sirandedDNAAnnealingofprimercreatesashortMrrichdCTPdGTPofdoublc-su

3、TGelclectrophorrxhand^ntnnw1ic»gniplwddClAGACTdcl<；CGAGA(rr1trariioumixturrw-(C~Ikrmnplrinrntkthrnrigmaltrinphte^tr.ind($'•55：—T—C—G~C~A~I—Rruilt;第二节核酸的超速离心及核

4、酸的凝胶电泳一、核酸的超速离心超速离心口J以分离超螺旋DNA（密度大），线性DNA（密度小）和闭环DNA（密度居中）。也可以分离RNAo二、核酸的凝胶电泳从细菌抽提得到的质粒DNA样品中不含线状DNA松池忆OC,OpencircularDNAKUkXtD超螺旋.CCCrcovaient)y

5、retchofdouble-stnindeciDNA飞DNA的酶法（末端终止法）测序Singk-ttmruledDNAtobeicqi>cnrodiicupfilvnirrawOtirdNTPiiridiculethxrlylabeledKHHA厂口HHddcrrp(ckiNn1!ddATTddTTP4rrariionmimrrsdd<；TPddl；GAtnA-T-C-G-oXTRcxiingvqurncebottomtotop:—A—Gr-C—G

6、~I—A"G-C—InconiplrmrmhihroriginalirrnplatrstrandiS'f5'):—T-C一G"*C-A・T・C・RcmiIl二、DNA的化学法测序GA+GC+TCAAT51r-T（：CTGAT（：CCA（；TCTA3*5*AT（：T（；A（XXrrAGTCXT-‘1’3*<>—p-o—oII<>MrthiL*tion5*OUNAfragment(>orop—mio—roRingoprninjiwMha

7、lLaboPipmcianr0L<>hiuVICH,Hv

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