第15章 核酸与核酸的研究方法.doc

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1、第十五章核酸核酸是遗传物质1868年瑞士Miesher.从脓细胞的细胞核中分离出可溶于碱而不溶于稀酸的酸性物质。间接证据：同一种生物的不同种类的不同生长期的细胞，DNA含量基本恒定。直接证据：T2噬菌体DNA感染E.coli用35S标记噬菌体蛋白质，感染E.coli，又用32P标记噬菌体核酸，感染E.coliDNA、RNA的分布（DNA在核内，RNA在核外）。第一节核酸的化学组成核酸是一种线形多聚核苷酸，基本组成单位是核苷酸。结构层次：核酸核苷酸磷酸核苷戊糖碱基组成核酸的戊糖有两种：：D-核糖和D-2-脱氧核糖，据此，可以将核酸分为两种：核糖核酸

2、（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）P330表5-1两类核酸的基本化学组成一、碱基1.嘌呤碱：腺嘌呤鸟嘌呤2.嘧啶碱：胞嘧啶尿嘧啶胸腺嘧啶P331结构式3.修饰碱基植物中有大量5-甲基胞嘧啶。E.coli噬菌体中，5-羟甲基胞嘧啶代替C。稀有碱基：100余种，多数是甲基化的产物。DNA由A、G、C、T碱基构成。RNA由A、G、C、U碱基构成。一、核苷核苷由戊糖和碱基缩合而成，糖环上C1与嘧啶碱的N1或与嘌呤碱的N9连接。核酸中的核苷均为β-型核苷P332结构式腺嘌呤核苷胞嘧啶脱氧核苷DNA的戊糖是：脱氧核糖RNA的戊糖是：核糖二、核苷酸核苷中戊糖C

3、3、C5羟基被磷酸酯化，生成核苷酸。1、构成DNA、RNA的核苷酸P333表5-32、细胞内游离核苷酸及其衍生物①核苷5’-多磷酸化合物ATP、GTP、CTP、ppppA、ppppG在能量代谢和物质代谢及调控中起重要作用。②环核苷酸cAMP（3’，5’-cAMP）cGMP（3’，5’-cGMP）它们作为质膜的激素的第二信使起作用，cAMP调节细胞的糖代谢、脂代谢。③核苷5’多磷酸3’多磷酸化合物ppGpppppGppppApp④核苷酸衍生物HSCoA、NAD+、NADP+、FAD等辅助因子。GDP-半乳糖、GDP-葡萄糖等是糖蛋白生物合成的活性糖

4、基供体。第二节DNA的结构一级：脱氧核苷酸分子间连接方式及排列顺序。二级：DNA的两条多聚核苷酸链间通过氢键形成的双螺旋结构。三级：DNA双链进一步折叠卷曲形成的构象。一、DNA的一级结构DNA的一级结构是4种脱氧核苷酸（dAMP、dGMP、dCMP、dTMP）通过3/、5/-磷酸二酯键连接起来的线形多聚体。3/、5/-磷酸二酯键是DNA、RNA的主链结构。P334图5-1书写方法：5/→3/：5’-pApCpTpG-3’，或5’…ACTG…3’（在DNA中，3/-OH一般是游离的）在DNA分子中，不变的骨架成分磷酸二酯键被逐渐省略，真正代表DN

5、A生物学意义的是碱基的排列顺序。遗传信息贮存在DNA的碱基排列顺序中，生物界生物的多样性即寓于DNA分子4种核苷酸千变万化的精确的排列顺序中。二、DNA的二级结构1953年，Watson和Crick根据Chargaff规律和DNANa盐纤维的X光衍射数据提出了DNA的双螺旋结构模型。1、Watson-Crick双螺旋结构建立的根据①Chargaff规律1950年a.所有DNA中，A=T，G=C且A+G=C+T。P334表5—4。b.DNA的碱基组成具有种的特异性，即不同生物的DNA皆有自己独特的碱基组成。c.DNA碱基组成没有组织和器官的特异性。

6、d.年龄、营养状况、环境等因素不影响DNA的碱基组成。②DNA的Na盐纤维和DNA晶体的X光衍射分析。相对湿度92%，DNA钠盐结晶，B—DNA。相对湿度75%，DNA钠盐结晶，A—DNA。Z—DNA。生物体内DNA均为B—DNA。Franklin的工作2、Watson-Crick双螺旋结构模型P335图5—2a.两条反平行的多核苷酸链绕同一中心轴相缠绕，形成右手双股螺旋，一条5’→3’，另一条3’→5’b.嘌呤与嘧啶碱位于双螺旋的内侧，磷酸与脱氧核糖在外侧。磷酸与脱氧核糖彼此通过3/、5/-磷酸二酯键相连接，构成DNA分子的骨架。宽1.2nm宽

7、0.6nm大沟小沟深0.85nm深0.75nmc.螺旋平均直径2nm每圈螺旋含10个核苷酸碱基堆积距离：0.34nm螺距：3.4nmd.两条核苷酸链，依靠彼此碱基间形成的氢链结合在一起。碱基平面垂直于螺旋轴。A=T、G=CP336图5—4碱基互补原则具有极重要的生物学意义，DNA的复制、转录、反转录等的分子基础都是碱基互补。1、稳定双螺旋结构的因素①碱基堆积力（主要因素）形成疏水环境。②碱基配对的氢键。GC含量越多，越稳定。③磷酸基上的负电荷与介质中的阳离子或组蛋白的正离子之间形成离子键，中和了磷酸基上的负电荷间的斥力，有助于DNA稳定。④碱基处

8、于双螺旋内部的疏水环境中，可免受水溶性活性小分子的攻击。二、DNA二级结构的不均一性和多型性（一）DNA二级结构的不均一性1、反向重复序