微生物实验指导全文(精)

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1、实验一显微镜的使用微生物的个体很小，必须用放大倍数高的、结构精密的显微镜，才能了解其个体的形态特征及特殊的繁殖方式。因此，显微镜是学习微纶物的重要工具，只有正确并熟练地常握显微镜的使用方法，才能研究和观察微生物的形态。本实验通过观察细菌的染色涂片标本，重点练习和掌握油镜的使用方法。—•、器材准备1、具油镜头的显微镜。2、细菌染色涂片标木若干片。3、香柏油、一甲苯和擦镜纸。二、显微镜的构造1、机械部分显微镜的机械部分包括镜座、镜身、镜筒、载物台、物镜转换器、推进器、粗和细调螺旋等。2、光学部分：光学部分包括目镜、物镜、聚光镜、虹彩光圈、反光镜等。三、显微镜的性能显微

2、镜的总放大倍数等于物镜放大率和日镜放大率的乘积。但显微镜性能优劣，不只是视其放大倍数的高低，而更主要是视其辨晰细微结构的能力，即性能良好的显微镜必须使观察的物体放大倍数高，而口清晰。显微镜辩析细微结构的能力可用分辨率表示。其能够辨晰的细微结构愈小，则分辨率愈高，分辨率的高低，首先取决于物镜的性能，其次为目镜和聚光镜的性能。若设物镜分辨出的物体两点间的最短距离为D,则D二光波长度二久二2一数值口径一册一2®屏2D——物镜分辨出物体两点间的最短距离。九——光波长度。n——介质折射率。sin-——镜口角半数之正弦。2由上式可见，D值愈小，物镜的分辨率愈高，愈能分辨出物体

3、的细微细构，物象愈清楚。根据上式看出，可通过减低波长、增大介质折射率和加大镜口角三方面来提高分辨率。对丁•普通光学显微镜，采用增大介质折射率来提高数值口径，是提高分辨率的可行途径。四、显微镜的使用：显微镜应直立实验台上，不要倾斜，因微生物学镜检过程中，常用水浸片和油浸片,如显微镜台倾斜，将导致水或香柏油流动，影响观察。应将显微镜放正，把低倍物镜旋到镜筒下方，转动粗螺旋，使镜头与载物台距离约0.5cm,.1:升聚光器，使与载物台表面相距约1.0mm,左眼看着Fl镜调节反光镜角度，开闭光圈，使视野内得到最佳照明为止。将细菌染色涂片标本置于载物台上，涂片部位放在正中，下

4、降低倍物镜至标本约0.5cm处，观察H镜并调转细螺旋，以获得清晰的物像，再移动推进器，将所观察的部位置于视野中心。将低倍镜转成高倍物镜，再做进一步调整。经过低倍和髙倍物镜的初步观察就能转换成油镜正式观察。油镜放人倍数很高，其工作距离很短，一般只有0.19mm,应特别小心，以免损坏镜头和标本。在使用油镜时,标木上要滴一滴香柏油，再将镜头徐徐下降浸入香柏油中，直到几乎与标木相接触为止。左眼看看目镜，向上转调粗螺旋，观察到模糊标本物像后，改用细螺旋，至标本物象清晰为止。a、T•燥系物镜b、油浸系物镜图1干燥系物镜与油浸系物镜光线通路在使用油镜时加香柏油，是因香柏油的折光

5、率是1.515,接近丁•玻璃1.52,大丁•空气的1.0；由于介质的折光率相近，光线折射少，进入汕镜的光线增多，物镜的分辨率提高。这样，就能看清检视物了。见图1五、显微镜的保养：汕镜使用完后，必须用擦镜纸去擦镜头上的香柏油，再用擦镜纸沾少量二甲苯揩擦镜头，随后用一片擦镜纸将残余二甲苯擦净，否则粘固透镜的胶质会被二甲苯溶液溶解,日久镜片易移位脱落。物镜成“八”字形，紧靠载物台；聚光器放在最低处，反光镜直立，用纱布擦T•净各部位并把纱布盖上，放回木箱中。六、细菌形态的观察按油镜的使用方法，每个同学自己动手找出一片染色涂片标本并绘图，其余的涂片,可互相观察或从示范片绘出

6、。七、回答问题1.使用油镜时,为什么要加香柏油？能否用水或其它油代替?（附：一些物质的折光率）香柏油1.515甘油1.475石蜡油1.481空气1.0亚麻油1.47冬青油1.536水1.33松节汕1.524玻璃1.52丁香油1.5352.油镜使用完毕后应注意哪些问题?实验二微生物染色（一）一、目的：学习微生物的涂片染色的操作技术，掌握微生物的简单染色，革兰氏染色的基本原理和方法。二、原理：染色是细菌学中一个重耍而且很基本的技术，由丁•微生物与各种不同性质的染料具有一定的亲合力，从而使微生物着色，着色后的菌体折光性弱，色慕明显。在显微镜下容易观察细胞的内部结构及其内

7、含物，因此，微生物染色是进行微生物形态观察的重要方法之一。染色分为单染（简单染色），复染（革兰氏染色，抗酸染色），单染较简单，以同一种染料使菌体着色，以显示微生物的形态；复染中的革兰氏染色是一种重要的鉴别染色，利用两种不同性质的染料，即草酸钱结晶紫和沙黄染液先后染色菌体，当用酒精脱色后，如果细菌能保持草酸钱结晶紫与碘的复合物的颜色，即呈紫色的细菌叫革兰氏阳性菌；如果草酸镀结晶紫与碘的复合物被酒精脱掉，菌体染上沙黄的颜色，呈红色叫做革兰氏阴性菌。三、材料与用具：（—）大肠杆菌（Escnerichiacoli）金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）

8、枯草芽泡杆