大蒜SOD酶性质研究

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1、大蒜SOD酶性质研究摘要：超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase,SOD)是生物体内专一清除超氧阴离子的蛋白酶。自然界中SOD分布极广，其含量随生物体的不同而不同，即使同一种生物的不同组织或同一组织的不同部位，其SOD的种类和含量也有很大差别。大蒜是SOD含量较丰富的天然植物之一。本论文探讨了从大蒜中提取与纯化SOD的工艺路线、优化条件、纯化效果及大蒜SOD的生化性质。实验结果表明，经过三次纯化，大蒜SOD的比酶活有显著提高；且大蒜SOD具有较好的热稳定性，在60°C时酶活达到最大，总体呈先增后减的趋势。关键词：大蒜；超氧化物歧化酶；纯

2、化；性质Abstract:SuperoxideDismutaseisakindofimportantenzymeinorganism,whichcanspecificallyeliminatethesuperoxideanion・SODareverywidespreadinnature,anditscontentvarieswiththeorganism,evenwithabiologicalordifferentorganizationsindifferentpartsofthesameorganization,thetypeandcontentof

3、SODisalsoverydifferent・GarIicisrichinSODcontentofnaturalplants.Thisthesisdiscussestheprocessroute,optimumconditions,resu11ofpurificationabouttheextractionandpurificationofSODfromgarIicandthebiochemicalpropertiesofgarIicSOD・ExperimentalresuItsshowthatafterthreepurification,activi

4、tyofgarIicSODwassignificantIyimproved・GarIicSODhasgoodthermaIstabiIityandmaximumactivityat60°C・FirstincreaseafterreductionoftheoveralItrendshowed・Keywords:garIic;superoxidedismutase;purification;properties大蒜是人们喜爱的一种香辛蔬菜和调味料，历来被认为具有保健和治疗作用，其活性物质主要是蒜氨酸和超氧化物歧化酶(SOD)oSOD是生物体内产生的超氧阴离

5、子自由基的清除剂，具有抗衰老，提高机体对多种疾病的抵抗力，增强机体对外界环境的适应力，减轻肿瘤患者在放疗、化疗过程中的严重毒副作用等生理功能。所以在医药、食品、化妆品、农业等方面都具有广泛的应用。大蒜中SOD含量较高，其活性是一般果蔬的数倍，被认为是人类重要的SOD来源。本文以市场上销售的大蒜为材料，通过分离提取大蒜的SOD粗酶,并用氯仿一乙醇沉淀、丙酮沉淀、硫酸饺分级沉淀对SOD粗提物进行分离纯化，测定大蒜不同温度下SOD活力变化，为今后实际研究或提取大蒜的SOD粗酶提供一个选择依据。1.试剂与仪器1.1实验材料市售新鲜大蒜1.2试剂配制CD0.05

6、mol/L磷酸缓冲液（pH为7.8使用91・5mL0.05ml/LNaHP04与8・5mL0・05mol/LNaH2P04配置而成）;(2)氯仿一乙醇混合液(氯仿：乙醇为3:5)(3)标准蛋白质溶液：《用移液枪吸取1ml浓度为1mg/mI标准蛋白质溶液，溶于蒸徭水并定容至10ml,制成0.1mg/ml的原液)、(4)考马斯亮蓝G-250(0.01%)染液：(称取0.01g考马斯亮蓝G-250,溶于5ml90%乙醇中，加入85%(m/v)的磷酸10ml,最后用蒸徭水定容至100ml(此溶液不宜久存，在常温中可放置广2个月)，将定容好的染液过滤并装入棕色瓶

7、中保存〉(5)130mmoI/1甲硫氨酸溶液(称1.9399gmet用磷酸缓冲液定量至100ml)（6）750umol/lNBT（称0.06133gNBTPBS定量至100ML（避光）（7）100umol/LEDTANA2（称0.03721gEDTANA2,用PBS定量至100mI）（8）20umoI/1核黄素（称0.0753G核黄素用蒸徭水定量至100ml（避光））（9）表1贮备液及凝胶的配制贮阀lOOnd溶液中的含量丁讥［

8、凝胶的配制1NHC148mlATris36g四甲基乙二胺0.24mlC丙烯酰胺30g甲叉双丙烯酰胺0・8gE核黄素4mgB1N

9、HC148mlTris5・9g四甲基乙二胺0.46ml丙烯就胺10gu甲叉双丙烯酰胺2・兄F蔗