资源描述：
《热点实验：WB,IH,IF,ICC实验》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、【嘉美生物】即日起推出WB,IH,ICC,IF实验服务优惠活动，细则如下：1、嘉美生物提供原装进口抗体。 我实验室进行实验服务有若干年的历史，因此我们实验室存有大批的国外原装抗体；意味着实验者不必要花更多的钱去购买国外昂贵（一般都会需要2000元以上）的一抗。2、嘉美生物免费提供二抗以及所有的与实验相关的后续试剂。3、嘉美生物免费提供WB标本所需要的蛋白保护液。 该蛋白保护液可以保护样品在4度下保存半个月而不至于蛋白有损失。4、实验委托者之需要提供样品，即可完成整个实验。
2、 WB实验服务案例 一抗目的蛋白分子量稀释度公司/货号二抗稀释度GoatRock1antibodyAbout160kD1:500SANTA，SC-6055RabbitAntiGoatIgG/HRP1:40,000GoatRock2antibodyAbout160kD1:500SANTA，SC-1851RabbitAntiGoatIgG/HRP1:40,000MouseGAPDHantibodyabout37kD1:800SANTA,SC-365062GoatAntimouseIgG/HRP1:80
3、,000注：SDS-PAGE凝胶浓度为12%；阳性条带以Gelpro4.0 版凝胶光密度分析软件进行分析，测其IOD（integratedopticaldensity）累积光密度参考值。Fig1： Lanes:Lane 1Lane 2Lane 3Lane 4Lane 5Lane 6Rows(IOD)(IOD)(IOD)(IOD)(IOD)(IOD)Rock1242.39337.97229.78233.16151.48205.53Rock2233.48219.11238.76191.611
4、51.18203.66GAPDH160.18130.47141.06156.13147.77151.07样本编号253828232624 WB操作规程一．设备和试剂1．设备①电泳电源Mini-PROTEAN3ElecreophoresisCell,MiniTeans-BlotModule,andPowerPacBasicPowerSupply(BIO-RAD,Catalog#165-3323)②电泳仪及附件Mini-PROTEAN3ElecreophoresisCell(BIO-RAD,Catalog#
5、165-3301)③电转仪及附件MiniTeans-BlotElecreophoresisTransferCell(BIO-RAD,Catalog#170-3930)④NC膜PIERCE，Catalog#88018⑤滤纸Whatman,3MMCHR2.试剂①凝胶试剂（实验室常备）试剂名称厂家30%丙烯酰胺溶液SIGMATris-BaseSIGMA10%SDSSIGMA10%过硫酸铵SIGMATEMEDSIGMA ②TotalproteinExtractionKit，ProMab•美国，Cat.No：SJ-
6、200501 RenewableBuffer膜再生液，ProMab•美国，Cat.No：SJ-200512天然膜蛋白抽提试剂盒ProteoExtract™(M-PEK)，MERCK•德国，Cat.No：444810天然浆/核蛋白分离抽提试剂盒NucBusterTMProteinExactionKit，MERCK•德国，Cat.No：71183-3Bradford蛋白浓度测定试剂盒，嘉美生物•中国，Cat.No：BRAKIT细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒，嘉美生物•中国，Cat.No：P1001细胞膜蛋
7、白与细胞浆蛋白抽提试剂盒，嘉美生物•中国，Cat.No：P1003③常用溶液及缓冲液A．5%积层胶所用溶液按总体积2.5ml：ddH2O：1.7ml30%丙烯酰胺溶液：0.42ml1.0mol/LTris(PH=6.8)：0.315ml10%SDS：25ul10%过硫酸铵：25ulTEMED：3ulB．分离胶溶液配方参考表 C．电泳缓冲液，1L3gTris-Base、14.4g甘氨酸、1gSDS，加蒸馏水至IL，pH应该在8.3左右。也可以制成10×的储存液，在室温下长期保存。D．电泳转移缓冲液,1L3g
8、Tris-Base、14.4g甘氨酸、甲醇200ml,加蒸馏水至1L,也可以制成10×的储存液，在湿温下长期保存。E．5×样品缓冲液,10ml0.6ml1mol/L的Tris-HCl（Ph6.8）、5ml50%的甘油、2ml10%的SDS、0.5ml2-巯基乙醇、1ml1%溴酚蓝，0.9ml的蒸馏水，可在4℃保存数周，或在-20℃保存数月。④二抗稀释液用1%BSA-PBS（含0.05%TWEEN20）稀释。常用Secondar
