固相萃取-反相高效液相色谱法同时测定人血浆中五种苯二氮卓类药物浓度及其临床应用

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1、学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学

2、位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日汕头大学医学院硕士学位论文固相萃取-反相高效液相色谱法同时测定人血浆中五种苯二氮卓类药物浓度及其临床应用研究生：郑付春导师：谭学瑞教授汕头大学医学院第一附属医院药剂科摘要苯二氮卓类药物为镇静、催眠、抗焦虑的临床首选药物，具有镇静催眠、抗焦虑、抗惊厥、抗癫痫、中枢性肌松等中枢神经系统抑制的药理作用。尽管有效安全，但长期使用该类药物仍可致耐受性、依赖性，突然停药也会引起撤药综合征；且大剂量可损害患者的近期记忆，引起暂时性的健忘症，也可引起患

3、者外周神经肌肉阻断等。本类药物与其它药物存在着相互作用，如：乙醇可增强苯二氮卓类药物的不良反应等。苯二氮卓类药物一次滥用或长期使用都有可能引起急性或慢性中毒，特别是与其他镇静剂混合使用时，中毒的可能性更大，因而也是急诊药物中毒的常见药物。而且，与麻醉药品相比，苯二氮卓类药物品种繁多，较易获得，使用广泛，易致滥用和依赖。因此建立快速、简便、准确的体内苯二氮卓类药物分析检测方法具有重要实用价值和意义，不仅可应用于临床对这类药物进行治疗药物监测，观察疗效与不良反应，以支持神经、精神疾病的合理、安全用药，而且也能为中毒药物分析提供依据。地西泮、奥沙西泮、氯

4、硝西泮、三唑仑和阿普唑仑是临床常用的五种苯二氮卓类药物。本类药物结构相似，极性相近，同时分离和测定此类药物有一定难度；且生物样品量一般都较少，而血样中本类药物的含量往往非常低（血药浓度一般在ng/mL-ug/mL之间）；有的药物如地西泮还会在体内产生奥沙西泮等一系列活性代谢产物，血液中药物原形、体内代谢产物与大量内源性干扰物质并存。因此，如何对样本进行预处理，以减少杂质干扰，并对痕量组分进行提取、分离、富集，以提高分析方法的灵敏度显得尤为重要。气-质联用或液-质联用用于分析本类药物，但由于仪器昂贵，很难在临床得到广泛应用。高效液相色I汕头大学医学院

5、硕士学位论文谱法广泛地应用于分析体内本类药物，具有快速、分离效果好、准确度高的优点。现有的研究报道多是对其中一些药物的测定，但没有同时测定其活性代谢产物（如奥沙西泮），且多用传统的液-液萃取法预处理血液样本。而且有的方法较适合法医学鉴定：用的样本量较大，灵敏度较低，不适合于治疗药物监测。本文旨在建立专属性强、灵敏度高、重现性好、准确可靠、操作简便的固相萃取法预处理血液样本，及等度洗脱的反相高效液相色谱法，用二极管阵列检测器同时测定人血浆中五种苯二氮卓类药物，并以三环类抗抑郁药氯丙咪嗪为内标，快速分析体内本类药物的浓度。本文含二个部分：以高效液相色谱

6、法-二极管阵列检测器同时分析测定五种临床常用苯二氮卓类药物的血药浓度；用固相萃取法对人血浆样品进行预处理。一、高效液相色谱法-二极管阵列检测器同时分析测定五种临床常用苯二氮卓类药物的血药浓度方法：采用内标法定量。色谱条件如下：色谱柱：XTerraC8RP（4.6×150mm，5um）分析柱，Waters公司预柱：Zobax-ExtendC18（4.6×10mm，5um），Agilent公司流动相：乙腈：50mM磷酸缓冲液（pH3.0）=26.8：73.2（v/v）流速：1.2mL/min柱温：45℃DAD检测器：220nm进样量：50uL结果：结果

7、显示，被测五个药物的日内误差（RSD）为2.2%-12.6%，日间误差（RSD）为2.1%-13.0%。在较宽的范围内均呈良好的线性关系：奥沙西泮（7.5–2000ng/mL）、地西泮（7.5–500ng/mL）、氯硝西泮、阿普唑仑及三唑仑（5–200ng/mL），相关系数均在0.9994以上。地西泮的最低检测限为3.2ng/mL，奥沙西泮的最低检测限为2.2ng/mL，氯硝西泮的最低检测限为1.1ng/mL，阿普唑仑的最低检测限为1.5ng/mL，三唑仑的最低检测限为1.4ng/mL。结论：建立了等度洗脱的高效液相色谱法，可以在21min内同时分

8、离测定五种苯二氮卓类药物，并以三环类抗抑郁药氯丙咪嗪为内标，方法操作简便、快速、精密度好、结果准确可靠，适于临床对血浆样本