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《黄嘌呤氧化酶高产菌株发酵培养基的优化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第27卷第5期计葬机与应用化母Vol.27,No.52010年5月28日Co呷utersandApPliedChemist叮May,2010黄嗓吟氧化酶高产菌株发酵培养基的优化陈素华,许小平(福州大学化学化工学院,福建,福州,350108)摘要:为提高生产菌株的产酶水平,本文采用响应面设计方法优化了1株产黄嗓吟氧化酶诱变菌A雌知旧6哪加rUW6的培养基组成首先用Placket一Burynan设计出影响产酶的3个重要的培养基成分:乳糖黄嗓吟和(NH)2504然后利用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,再通过Box一Behnken
2、设计和响应面分析方法确定出3个主要影响因素的最佳浓度,分别为:乳糖12.83岁L,黄嚓吟0.7500g/L,(NH4)250.2.217岁L最终酶活力达12.05U/mL,与初始7.669U/mL相比,提高了57.13%响应面法,试验次数少周期短并能研究多因素间的交互作用,求得因素与响应面值的回归方程并预测最佳值,本文采用此种方法有效地求得产酶菌株的最佳发酵培养基组成关镇词:黄嚷吟氧化酶;发酵培养基;Placket一Burman;响应面分析法中圈分类号:TO464.8文献标识码:A文章编号:1014160(2010)05肠
3、3捅7引言2.2培养基种子培养基:NaCI5.0岁L,牛肉膏3.0了L,蛋白脉黄嗦吟氧化酶(xanrhineoxidase,xoD)(EC.1232),是10.0岁L,pH值7.5生物体内核酸代谢过程中重要的限速酶川,参与体内核酸的基本产酶培养基:KZHpo#3H204.15岁L,KHZPo∃分解代谢,促进铁的吸收与转运,检测SOD(超氧化物歧化0.26%L,NaCI1.0岁L,CaC124.sm岁L,FeSO#7H200.5酶)的活力,测定血清无机磷的含量,提高病毒哇的转化率,m岁L,MgSO;#7H200.Zm岁L,(
4、NH4):503.0g/L,黄嗓吟测定鱼的新鲜度等,xoD产物还具有抗菌作用川黄嗦吟0.6%L,乳糖10.0g/L,pH值8.0氧化酶的应用广,如果只靠动物来源其应用将受限制自2.3培养方法20世纪60年代起,国外已经致力于开发微生物来源的将菌株A雌hro6acterUW6培养至对数生长期,按8%XOD,目前国内外对细菌XOD的研究仍处于初步阶段,研究(WV))的接种量转接于装有loml基本产酶培养基的250细菌XOD的发酵生产已越来越受重视nil三角瓶中,犯&,210rpm摇瓶培养至产酶高峰期(42h)单因子法通常需
5、要大量的实验和较长的实验周期,且易后取出,冷冻离心得菌体,洗涤菌体两次后加人一定量的缓因忽略因子间的交互作用而得出错误结论,正交实验法无法冲液,超声波法破碎细胞壁,离心所得上清液为粗酶液,取粗找到整个区域最佳的因素组合和响应面的最优值!∀,而采用酶液检测酶活力Plaekett一Burman法[4一1和响应面法[6一](aes即nssudhce2.4分析方法methodology,RSM)可以更广泛的考察因素的交互作用,获得采用辣根过氧化酶分光光度法测定黄嗓吟氧化酶酶最优的组合[一0],此法在微生物方面已应用广泛!川
6、本试活!∋]验先以实验室保藏的1株产黄嗦吟氧化酶的菌A成robacterX为出发菌株,经过大量诱变育种工作而获得一株产酶较高3实验结果与分析的诱变菌A雌hrobacterUW6,采用Placket一BuInan法将发酵3.1Placket#Bun.an法结果与分析培养基各组分筛选,确定主要影响因素;然后用Box一BehnkenPlacket一Burman是以不完全平衡块为原理的实验设计,设计,以最陡爬坡试验的值为中心点,对筛选出的重要影响能从众多的考察因素中快速有效的筛选出最重要的几个因因素进行响应面优化,预测出最优培养基组
7、成,提高黄嗦吟氛供进一步详细研究用[la一15]氧化酶产生菌的产酶水平本文选用实验次数N=12的Placket一Burman实验设计方法,以基本产酶培养基中的6种成分(乳糖黄嗓吟2材料与方法(NH∃)2504FeSO;#7H20CaCI:M步0;#7H20)作为PB2.1菌株实验的6个因素(XlX:X3x,x,丸)进行部分考察,每个A毗mbacte;UW6菌株,本实验室诱变筛选因素分别取高低2个水平(高水平为低水平的1.5倍),另设收稿日期二2(X为一10一;修回日期:2010刃l一17荟金资助:福建省自然科学基金资助项目
8、(Zo8J010).作者简介:陈家华(1984一),女,福建人,硕士,生物化工专业联系人:许小平,E一mail:xu@俪.曰u.cn.664计葬机与应用化母2010,27(5)3个虚拟变量(x.X∃x)用以估计实验误差,响应值为酶表3最陡爬坡路径试验设计及结
