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1、第10卷第1期解剖科学进展Vol.10No.12004年PROGRESSOFANATOMICALSCIENCES2004大鼠睾丸支持细胞的分离纯化与鉴定曹博,郑俊波,郭筠秋(哈尔滨医科大学组织胚胎学教研室,黑龙江哈尔滨150086)摘要目的简化大鼠睾丸支持细胞的分离纯化方法,通过不同方法对Sertoli细胞进行形态学观察鉴定。方法取鼠龄16~22天的雄性Wistar大鼠睾丸,采用酶次第消化,培养过程中纯化Sertoli细胞,并用多种方法对Sertoli细胞进行鉴定。结果大鼠睾丸支持细胞占培养细胞总数的90%以上。HE染色,Sertoli细胞突起很多,核仁清晰,
2、在胞质中可见吞噬物和大小不等的空泡;甲基绿派洛宁染色,Sertoli细胞富含RNA;Feulgen染色和透射电镜,核仁周围可见卫星核小体。结论本实验培养方法可获得更多、纯度高的Sertoli细胞,HE染色、甲基绿派洛宁染色、Feulgen染色和透射电镜是鉴定Sertoli细胞的有效方法。关键词大鼠;睾丸支持细胞;分离;纯化;鉴定+中图分类号R3355文献标识码A文章编号1006-2947(2004)01-0034-03IdentificationandIsolationandPurificationofTestisSertoliCellsinRatCAOBo,Z
3、HENGJunbo,GUOYunqiu(DepartmentofHistologyandEmbryology,HarbinMedicalUniversity,HeilongjiangHarbin150086China)AbstractObjectiveTosimplifythemethodofpurificationandcultureofthesertolicellsofrattestisandtoobservethesertolicellswithdifferentmethods.MethodsTestisareisolatedfrom16~22dayoldwistarr
4、atsandaresubjectedtosequentialenzymatictreatment.Thesertolicellswerepurifiedandidentifiedwithseveralmethods.ResultsMorethan90%ofthesertolicellswereisolatedandcultured.Nucleolusareclear,grainsandvacuolescanbeobservedinthecytoplasmwithHEstaining;DNAwasdyedintogreen,RNAwasdyedintoredwithMGPstaining
5、.ThesatellitenuclearbodyswereobservedinthenucleuswithFeulgenstainingandtransmissionelectronmicroscope(TEM).ConclusionMoresertolicellswereobtainedbythisexperimentmethodwithhighpurification.HE,MGP,FeulgenstainingandTEMareusefulmethodsforidentiflicationofthesertolicells.Keywordsrats;sertolicells;
6、isolation;purification;identificationSertoli细胞能分泌多种物质,如各种生长因子肤。纵行切开下腹部皮肤,取出睾丸,从附睾尾部剪等,同时睾丸组织是人和动物体内的天然的免疫豁断精囊,置于盛有PBS的培养皿中。仔细剥离睾丸[1]免区,在细胞移植和器官移植中具有很广泛的应被膜和血管,反复冲洗。用眼科剪将组织剪碎,先加[2]入025%胰酶于37水浴中作用5~15min,直到用前景。如何获得高纯度的Sertoli细胞并对其进行鉴定是很必要的。看见残存的间质被消化成黏液状即可,取出后加入冰冷的PBS洗涤两次(1000r/min,5min,4)去除1材
7、料与方法胰酶。再加入01%胶原酶V,在37水浴中消化[3]10min左右,用冰冷的PBS洗涤两次(1000r/min.11睾丸支持细胞的分离与纯化Wistar雄性大鼠16~22d龄,06%戊巴比妥钠5min,4)去除胶原酶。加入培养液,用巴斯德管腹腔注射麻醉(40mg/kg),碘酒和75%酒精消毒皮轻轻吹打,制成单细胞悬液,将其移入培养瓶中,置于37,无CO2培养箱中培养48h后,用DMEM/收稿日期2
