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1、氨基酸和生物资源·28·AminoAcids&BioticResources2001,23(2):28～31X卵磷脂的提纯、鉴定及应用韩轶,周扬,赵永芳(武汉大学生命科学学院,武汉430072)摘要:以大豆油脚为原料,采用适合于大量制备和实验室少量制备的全溶剂法,无机盐复合沉淀法和柱层析法,提取高纯度的卵磷脂,通过薄层层析,紫外光谱,红外光谱分析和HPLC等方法对其进行鉴定,并叙述了卵磷脂的应用价值。关键词:卵磷脂;薄层层析;紫外光谱;红外光谱;HPLC;应用中图分类号:Q545.1文献标识码:A文章编号:1006-8376(2001)02-0028-04前言卵磷脂分子含甘油、脂肪酸、磷酸及胆
2、碱卵磷脂是一种生命基础物质,它不仅是构等,其结构式如下:成人体生物膜的重要组成成分(主要集中在大O脑、神经系统、免疫系统及心、肝、肾、生殖腺等OCH2OCR1重要器官内),而且是胆碱和必需脂肪酸的原料R2COCHO来源。它对维持生物膜的生理活性和机体的正CH2OPOCH2CH2N(CH3)3常代谢起关键作用,被誉为“细胞的保护神”、CHCH“血管的清道夫”“、开启大脑的动力”与“食用化式中R1为硬脂酸,R2为油酸。天然卵磷妆品”,可见卵磷脂是一种功能全面的营养品,脂常是含有不同脂肪酸的几种卵磷脂的混合它在全身细胞、血液、器官三个层次上发挥全方物。在卵磷脂分子的脂肪酸中常见的有软脂位作用。酸、硬
3、脂酸、油酸、亚油酸、亚麻三烯酸和花生四70年代以来,美国就把卵磷脂用于保健食烯酸等α,位(R1CO2)的脂肪酸通常是饱和脂肪品,总销量仅次于复合维生素C和维生素E,名酸β,位(R2CO2)的脂肪酸通常是不饱和脂肪列第三位。卵磷脂大都来自于食物,因此没有酸。不良作用,据WHO(世界卫生组织)专门委员卵磷脂为白色蜡状固体,在低温下也可结会报告,卵磷脂比食用维生素更安全,卵磷脂的晶,不溶于丙酮,但溶于乙醇及乙醚,用氯仿—缺乏是造成心脑血管疾病等现代社会“文明病”甲醇混合溶剂很容易从组织细胞中将其提取出的主要原因之一。近些年来,国内对卵磷脂的来,卵磷脂暴露在空气中,形成过氧化物,最终研究报告较多,其中
4、介绍了不少提纯的方法,本形成黑色过氧化物的聚合物。文旨在阐明各法的优缺点,及应注意的各个方面。2大豆卵磷脂的提纯2.1全溶剂法1卵磷脂的结构和性质称取一定量的浓缩大豆磷脂,加适量丙酮X通讯作者收稿日期:2000—11—01作者简介:韩轶,(1978—),男,武汉大学生命科学学院生物工程技术及制品专业学生。韩轶,等.卵磷脂的提纯、鉴定及应用·29·浸洗,静置分层。倾去上层丙酮浸洗液,取下层每100ml洗脱液收集为一段,用高效液相色谱脱油磷脂加适量乙醇萃取。静置分层,取上层鉴定,SPC出现在ⅣⅤⅥ段,主峰在Ⅵ段(表乙醇提取液用旋转蒸发仪减压蒸发浓缩,回收1),纯度为91%,产量为0.622g,谱图
5、见图1,乙醇,向浓缩液中加水,80℃热浴中缓慢搅拌由图1可得基本上纯的卵磷脂峰。使磷脂溶解,加NaCl盐析,弃去废水,抽干后放入真空干燥箱中干燥。将干燥脱水的磷脂用乙醇溶解,加氧化铝搅拌吸附,过滤后再向滤液中加入活性炭,进行脱色。过滤,将滤液置旋转蒸发仪中减压蒸干,蒸干的大豆卵磷脂加无水丙酮反复浸洗,直到丙酮液呈无色澄清,洗去残余的水分、色素和油脂等,最终得到精制卵磷脂产品,产品用丙酮液封,低温保存。实验结果表明,当以卵磷脂得率为评价指(进样0.5ul)标时,最优化工艺条件是:丙酮脱油温度45℃,图1柱层析法谱图脱油时间1h;乙醇提取温度70℃,提取时间表1层析柱洗脱结果15min。r-Al2
6、O3对卵磷脂中杂质吸附的最佳洗脱液段ⅣⅤⅥ效果:吸附温度为25℃,时间30min。HPLC峰面积190282517799477782481该法提供的工艺路线简单且操作方便,对进样量/μl10100.5资源丰富,价格低廉,来源于大豆油脚的大豆卵SPC(δ)0.050.080.622磷脂的纯化极为有利,卵磷脂得率往往高于文纯度/%48.352.091.0献报导值。使用仪器及测试条件:2.2无机盐复合沉淀法高效液相色谱仪:HITACHI638—50;利用无机盐和卵磷脂可生成沉淀的性质,紫外检测仪:HITACHI650～102C,204把卵磷脂从有机溶剂中分离出来,由此除去蛋nm波长;白质、脂肪等杂质
7、,再用适当溶剂萃取出无机盐色谱柱:LICHROSORBS;—60,15cm和其他磷脂杂质(主要是脑磷脂),这样可大大流动液相:提高卵磷脂纯度,为工业生产提供了一种方法。乙腈+甲醇+水,体积比65∶21∶14;将大豆卵磷脂(SPC)粗品20g溶于250ml流速:1ml/min;无水乙醇中,滴加60%ZnCl2水溶液,得乳白色走纸速度:2.5cm/min.沉淀,分离出沉淀并溶于70ml氯仿,再用30%
