蛋黄卵磷脂的分离提纯及鉴定研究

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1、万方数据产品开发·试验研究一——_——_——_—●—————————————————————————————————一蛋黄卵磷脂的分离提纯及鉴定研究高兆建，甄宗圆，贺稚非，李绶章，李洪军，祝荣(西南农业大学食品科学学院重庆400716)丁5如日摘要主要阐述了分离提纯高纯度蛋黄卵磷脂的常用方法及近几年的最新研究成果，对适合于大量制备和实验室少量制备的溶剂分离技术、无机盐复合沉淀法、半透膜分离法、柱层析法、乙酰化法、超临界二氧化碳萃取法等进行了探讨；同时也简要概述了分析、鉴定卵磷脂的高效液相色谱、薄层层析、紫外

2、光谱、红外光谱分析等技术。关键词卵磷脂蛋黄分离提纯鉴定卵磷脂(1ecithin)是一种含磷的类脂类生理活性物质，同时又是一种天然表面活性剂”11，化学名称为磷脂酰胆碱。常态下，它呈淡黄色的透明或半透明的粘稠状。等电点pH值是6．7。卵磷脂广泛分布于动植物组织中，在植物性原料中，大豆含量较高；动物性原料中蛋黄含卵磷脂最多，达于物质总重的8％～10％。空问结构的卵磷脂分子是由一个极性的“头部”(甘油和胆碱磷酸脂部分)和两条非极性的“尾巴”(两个依附于甘油主框架上的脂肪酸)组成，它是典型的两性电解质”J。极性部分

3、磷酸上的H+和胆碱上的OH．一均可解离．呈两性，所以磷酸、胆碱和不解离的甘油具有亲水性；而非极性部分具有亲油性，故卵磷脂是优良的表面活性剂。具有很好的乳化性能。同时，它是构成人体生物膜的重要组成成分(所有细胞膜、核膜、线粒体、肉质网膜等生物膜的基础构成物质。还主要集中在大脑、神经系统、免疫系统及心、肝、肾、生殖腺等重要器官内)，也是人体必需的胆碱和必需脂肪酸的重要来源”J。因此，卵磷脂被广泛应用于食品、医药、化工、石油、纺织等诸多领域。在食品工业中，它可作为乳化剂、抗氧化剂、润饰剂、软化剂、分散剂、脱模剂等

4、。在医药方面，治疗动脉粥状硬化、脂肪肝、神经衰弱、营养不良及静脉注射脂肪乳的乳化剂和胆固醇结石的预防药物。近年来，世界卵磷脂发展迅速。年产量达到150Kt。美国中央黄豆公司、ADM公司、Riceland公司、德国LucasMayer公司等生产的数10种卵磷脂几乎囊括了世界市场。目前，我国已经有lO余家企业生产大豆卵磷脂，而且均是小规模的生产装置，还未形成工业化生产规模，技术水平也落后于世界先进水平㈨，生产蛋黄卵磷脂的厂家则更少。国内的卵磷脂产量远远不能满足市场需要，因此大部分卵磷脂特别是高纯度卵磷脂仍然依靠

5、进口。1卵磷脂的分离提纯1．1溶剂分离技术溶剂分离技术是一种传统的分离提纯卵磷脂的方法。它是根据蛋黄中各组分在溶剂中的溶解度不同进行分离的。分离时，所用溶剂～般为cl一．一一04的低级醇、正己烷、石油醚、乙醚、氯仿、丙酮等。卵磷脂在低级醇中溶解度较大，脑磷脂和鞘磷脂在低级醇中溶解度较小，但卵磷脂不溶解于丙酮。调整溶剂的pH值，温度，浓度，蛋白质发生变性、沉淀。利用此性质将蛋黄粉和一定量的有机溶剂一起搅拌，调整pH值，静置，离心。沉淀部分为蛋白质，上清液则为中性脂肪和卵磷脂的混合物。将此溶液进行减压浓缩，去除

6、溶剂。由于卵磷脂不溶于丙酮而中性脂肪易溶，再用丙酮对混合溶液进行萃取，即可分离出卵磷脂。此种方法是先去除蛋白质后，然后分离卵磷脂和中性脂肪，也可以先去除蛋黄油，再分离卵磷脂和蛋白质。具体做法是”o：精确称取20g蛋黄粉，加入石油醚30ml升溶解，再加入0～5℃的丙酮到500ml，然后分装到10个50ml离心管中，冰槽中放置15rain，用3000rpm的离心机离心10min。将上清液加丙酮同上处理。最后95％的乙醇和沉淀物混合搅拌。2003年第4期总第264期15万方数据nr耍—r五]臣互二互玉d产品开发·

7、试验研究静置．取上清液，利用旋转蒸发仪浓缩，即可得到卵磷脂。利用有机溶剂进行萃取时，有机溶剂的种类，用量浓度，萃取的温度、时间，搅拌时间，溶液的pH值，萃取的次数等因素都会对萃取效果产生重大影响。抽提卵磷脂肘使用二元或者多元溶剂往往比单一溶剂优越，同时温度不宜过高，这是因为卵磷脂在高温下，不饱和脂肪酸极易氧化失去生理活性。同时溶液的pH值也不宜在碱性条件下，因为弱碱或强碱环境中卵磷脂易发生分解，丧失生理活性。1．2无机盐复合沉淀法卵磷脂可与金属离子发生配合反应，形成配合物，生成沉淀。利用此种性质，可以把卵磷

8、脂从有机溶剂中分离出来，由此除去蛋白质、脂肪等杂质，再用适当溶剂分离出无机盐和磷脂杂质(主要是脑磷脂、鞘磷脂)，这样可以大大提高卵磷脂的纯度。c*ch，MyCl2。znck均可与卵磷脂发生配合反应形成复盐，但CaCl2和MyCl2提取卵磷脂较低，且毒性较大，所以ZnCl2是较理想的沉淀剂。据资料报道【7J，用ZnCl2乙醇纯化卵磷脂的具体方法是：将100g粗卵磷脂溶于1L95％的乙醇中，再加入4．5gznCb，生