卵磷脂的提纯、鉴定及应用

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1、28·氪基酸和生物资源AminoAcs8,-BioticRes。ur2001．23(2)：28-31卵磷脂的提纯、鉴定及应用’韩轶，周扬，赵永芳(武汉大学生命科学学院，武汉430072)摘要：以大豆油脚为原料．采用适合于大量制各和实验室少量翩备的全溶剂法．无机盐复台沉淀法和柱层析法，提取高纯度的卵磷脂，通过薄层层析，紫外光谱．红外光谱分析和HPLC等方法对其进行鉴定，井叙述了卵磷脂的应用价值。关键词：卵磷脂；薄层层折；紫外光谱i红外光潜；／-IPLC~应用中图分类号：Q545l文献标识码：A文章编号：1006—8

2、376(2001)02—0028一o4前言卵磷脂分子含甘油、脂肪酸、磷酸及胆碱卵磷脂是一种生命基础物质，它不仅是构等，其结构式如下：成人体生物膜的重要组成成分(主要集中在大0l脑、神经系统、免疫系统及心、肝、肾、生殖腺等卅重要器官内)．而且是胆碱和必需脂肪酸的原料Rr—_(卜CH0ll来源。它对维持生物膜的生理活性和机体的正c—O—O—CH2-CH2-N(CH~)3ff常代谢起关键作用，被誉为“细胞的保护神”、CHCH“血管的清道夫”、“开启大脑的动力”与“食用化式中R。为硬脂酸，为油酸。天然卵磷妆品”．可见卵磷

3、脂是一种功能全面的营养品，脂常是吉有不同脂肪酸的几种卵磷脂的混台它在全身细胞、血液、器官三个层次上发挥全方物。在卵磷脂分子的脂肪酸中常见的有软脂位作用。酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻三烯酸和花生四7O年代以来．美国就把卵磷脂用于保健食烯酸等，n位(R。0)的脂肪酸通常是饱和脂肪品，总销量仅次于复合维生素c和维生素E，名酸，B位(RzCO-)的脂肪酸通常是不饱和脂肪列第三位。卵磷脂大都来自于食物．因此没有酸。不良作用，据WHO(世界卫生组织)专门委员卵磷脂为白色蜡状固体，在低温下也可结会报告，卵磷脂比食用维生素更安

4、全．卵磷脂的晶，不溶于丙酮，但溶于乙醇及乙醚，用氯仿一缺乏是造成心脑血管疾病等现代社会“文明病”甲醇混合溶剂很容易从组织细胞中将其提取出的主要原因之一。近些年来，国内对卵磷脂的来．卵磷脂暴露在空气中，形成过氧化物．最终研究报告较多，其中介绍了不少提纯的方法，本形成黑色过氧化物的聚合物。文旨在阐明各法的优缺点，及应注意的各个方面。2大豆卵磷脂的提纯2．I垒溶剂法1卵磷脂的结构和性质称取一定量的浓缩大豆磷脂，加适量丙酮·通讯作者牦萼品羿嚣2罂l9t-7-&O—t)，男．武汉大学生命科学学院生物工程技术及制品专韭学生。

5、韩轶，等卵磷脂的提纯、鉴定及应用浸洗，静置分层。倾去上层丙酮浸洗液，取下层每100ml洗脱液收集为一段，用高效液相色谱脱油磷脂加适量乙醇萃取。静置分层，取上层鉴定．SPC出现在ⅣVⅥ段，主峰在Ⅵ段(表乙醇提取液用旋转蒸发仪减压蒸发浓缩．回收1)，纯度为91％．产量为0．622g，谱图见图1，乙醇，向浓缩液中加水，8O℃热浴中缓慢搅拌由图1可得基本上纯的卵磷脂峰。使磷脂溶解，加NaCI盐析，弃去废水，抽干后放人真空干燥箱中干燥。将干燥脱水的磷脂用乙醇溶解，加氧化铝搅拌吸附，过滤后再向滤液中加人活性炭．进行脱色。过滤

6、。将滤液置旋转蒸发仪中减压蒸干，蒸干的大豆卵磷脂加无水丙酮反复授洗，直到丙酮液呈无色澄清，洗去残余的水分、色素和油脂等，最终得到精制卵磷脂产品，产品用丙酮液封，低温保存。—-^——●-·J一oI234(era)实验结果表明，当以卵磷脂得率为评价指(进样0．5u])标时．最优化工艺条件是：丙酮脱油温度45℃，脱油时间1hl乙醇提取温度7()℃，提取时问图l柱层析法谱图表1层析柱洗脱结果15rain。r—A12对卵磷脂中杂质吸附的最佳效果：吸附温度为25℃，时问30rain。该法提供的工艺路线简单且操作方便，对资源丰

7、富，价格低廉，来源于大豆油脚的大豆卯磷脂的纯化极为有利，卵磷脂得率往往高于文献报导值。使用仪器及测试条件：2．2无机盐复合沉淀法高效液相色谱仪：HITACHI638—50；利用无机盐和卵磷脂可生成沉淀的性质，紫外检测仪：HITACHI650～102C，204把卵磷脂从有机溶剂中分离出来，由此除去蛋nm波长：白质、脂肪等杂质，再用适当溶剂革取出无机盐色谱柱：uc卜Ⅱos0RBs；—6o，15crl和其他磷脂杂质(主要是脑磷脂)，这样可大大流动液相：提高卵磷脂纯度，为工业生产提供了一种方法。乙腈+甲醇+水，体积比'6

8、5：21：14；将大豆卵磷脂(SPC)粗品20g溶于250ml流速：1ml／min；无水乙醇中，滴加60％ZnCl2水溶液，得乳白色走纸速度：2．5cm／min．沉淀，分离出沉淀并溶于7Oml氯仿．再用3O％(体积比)乙醇溶液萃取除去ZnCI2(用AgNO33卵磷脂的鉴定鉴别)。有机层蒸去氯仿．用乙醚．丙酮清洗沉3．1薄层层析淀1O次．蒸去乙醚，得大豆卵磷脂i3．1g．产