调肝方药对皮质酮、谷氨酸致PC12细胞损伤模型的保护效应及机制研究

《调肝方药对皮质酮、谷氨酸致PC12细胞损伤模型的保护效应及机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、广州中医药大学博士学位论文调肝方药对皮质酮、谷氨酸致PC12细胞损伤模型的保护效应及机制研究姓名：宋清申请学位级别：博士专业：中医基础理论指导教师：徐志伟20070401中文摘要应激(stress)指机体在受到各种内外环境因素刺激时所出现的非特异性全身反应，心理应激是机体通过认识、评价而察觉到应激原的威胁时引起的心理、生理机能改变的过程。随着社会发展和竞争压力的增加，心理应激已成为一个威胁人类健康不可忽视的重要因素。慢性心理应激在心脑血管病、内分泌疾病、神经精神疾病和自身免疫性疾病的发生中起重要作用，使机体出现正常衰老过程加速、学习记忆障碍、应激性精神紊乱、痴

2、呆、抑郁症、免疫力低下等多系统疾患，其中抑郁症是临床最常见的身心疾患之一。本病属于中医“郁证”范畴，其病机的核心是由于肝郁而造成郁证。肝为刚脏，五行归木，“体阴而用阳”，喜条达，恶抑郁，主疏泄。肝主疏泄通过调节气机、血和津液而调畅情志。情志变化过激，出现肝失疏泄、气机逆乱，造成一系列心身反应疾病，所以心理应激反应成为研究肝主疏泄调畅情志功能的神经生物学机制的切入点，而应用中医学肝主疏泄理论进一步探讨抑郁症的病因学机制和抗抑郁治疗药物的研究具有十分重要的意义。中医藏象及七情学说认为不良环境或精神刺激与疾病的发生发展密切相关，病理性的心理应激反应即属于中医学所述情

3、志异常的范畴，肝失疏泄所致生理病理改变的发生发展在一定程度上也是一种病理性的心理应激反应，即肝主疏泄功能在调节心理应激反应和抑郁症的防治中具有重要作用。本研究室长期以来从事肝主疏泄调畅情志功能的中枢神经生物学机制研究和探讨，取得了重要的研究成果和进展。近年重要工作是结合中医整体观和平衡观以及现代心理应激理论，以心理应激反应为切入点，提出中医学肝主疏泄调畅情志的功能存在着一定具体的神经生物学机制，并用方、证、效、脏腑功能本质的研究思路，通过建立慢性心理应激反应模型模拟肝失疏泄、情志异常的综合病理变化过程，根据实际病理变化组方用药体现出疏肝，柔肝，平肝以及清肝的综

4、合调治的思想，通过调肝方药加味四逆散在治疗上的药物效应来进一步反证和揭示肝主疏泄，调畅情志功能的有关神经生物学机制．本研究立足于以往研究基础，结合目前国内外的相关研究，在细胞和分子水平进．～步探讨调肝方药加味四逆散治疗效应的微观物质基础。实验选用具有神经元特性和功能的PCI2细胞，利用皮质酮(tort)、谷氨酸(61u)作用于体外培养的Pcl2细胞作为研究模型，体外模拟抑郁症病人出现的高糖皮质激素(Gc)水平及谷氨酸堆积状态，运用中药血清药理学方法、流式细胞术、免疫荧光、免疫印迹等方法，针对慢性心理应激可导致对神经细胞损伤这一关键问题，观察调肝治法方药加味四逆

5、散含药血清的药物学效应，从微观方面阐明和揭示调肝治法方药抗慢性应激致神经细胞损伤的机理，为今后研制开发抗抑郁症中药新药提供理论依据。本研究分为四部分：第一部分加味四逆散含药血清对皮质酮、谷氨酸致PCI2细胞损伤的保护作用抑郁症病人有不同程度的情绪紊乱以及神经精神系统的损伤，长期处于应激状态，HPA轴功能持续亢进，机体处于高水平的糖皮质激素状态。抑郁症发生后兴奋性氨基酸谷氨酸堆积，导致神经元变性，引起海马神经元的凋亡和死亡，甚至出现大脑功能形态损害。本部分实验观察调肝方药加味四逆散(JWSNS)含药血清对皮质酮、谷氨酸致PCI2细胞损伤的保护作用。加味四逆散组方

6、为柴胡59、自芍159、枳壳69、枸杞子159、山栀59、干地黄189、石决明309组成。实验选用SPF级雄性Wistar大鼠，将动物随机分为对照组、JWSNS低、中、高剂量组(分别含生药剂量0．846、1．69、3．384kg／L)。腹主动脉取血，分离制备含药血清。用倒置显微镜对培养的PCI2细胞、皮质酮、谷氨酸、JWSNS含药血清作用PCI2细胞24h后的细胞进行形态观察，用形态学方法证明PCI2细胞培养成功。采用i00、200、400Fmol／LCort、10、50、100∥mol几Glu及5％、10％JWSNS含药血清分别与Pcl2细胞共同孵育24h，

7、以盯T法测定细胞存活率，观察不同浓度皮质酮、谷氨酸及加味四逆散含药血清对PCI2细胞生长的影响，结果显示100∥mol／L、200∥mol／L、400鼻mol／Lcort组细胞存活率分别为72．31％、53．85％、26．10％，10∥mol／L、50口mol／L、100∥mol／L谷氨酸组细胞存活率分别为67．69％、43．32％、21．54％，不同浓度皮质酮和谷氨酸对PCI2细胞的生长均具有抑制作用，随着皮质酮和谷氨酸的浓度升高，细胞存活率明显降低，细胞损伤程度加重，与正常细胞对照组相比均有显著性差异(仄O．05—0．001)。5％JWSNS含药血清低、中

8、、高剂量组细胞存活率分别为86．76％