新型全肝脏去细胞化流程及干细胞支架内分化的实验研究

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1、论文题目：答辩委员会主席：委员会成员：论文答辩日期：2013．05．26温州医学院硕士学位论文目录缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6jE二i=二⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8第一部分大鼠全肝脏去细化支架的制作及鉴定1、材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82、结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯133、分析与讨论⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17第二部分新型去细胞化流程对细胞外基质含量的影响及细胞组分残留量检测1、材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯192、结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯243、分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28第三部分全肝脏去细胞化支架生物反应器系统内诱导WBF．344卵圆细胞肝细胞方向分化1、材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯302、结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯323、分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34，J、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4O综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51温州医学院硕士学位论文缩略词AP缩略词表(按字母顺序)英文全称AmmoniumpersulfateArcy／bis——arcyArcylamidebiSarcylamideDEPCEDTANACODPAGEPBSPIPMSFPVDFECMrpmSDS

4、TBSELISAHGFVEGFGAPDHHMGBIMHC——IGAGdiethylpyrocarbonateethylenediaminetetraaceticacidN——acetylcysteineopticaldensitypolyacrylamidegelelectrophoresisphosphatebuffersatinepropidiumiodidephenylmethylsulfonylfluoridepolyvinylidenefluorideextracellularmatrixrevolutionperminutesodiumdodecylsulfateTriS

5、buffersalineenzyme一1inkedimmuno—sorbentassayhepatocytegrowthfactor，中文全称过硫酸铵丙烯酰胺一双丙烯酰胺焦炭酸二乙酯乙二胺四乙酸N一乙酰半胱氨酸光密度聚丙烯酰胺凝胶电泳磷酸盐缓冲液碘化丙啶苯甲磺酰氟化物二氟化树脂细胞外基质每分钟转数十二烷基磺酸钠TriS缓冲液酶联免疫吸附测定肝细胞生长因子vascularendothelialgrowthfactor，；血管内皮细胞生长因子91yceraldehyde一3一phosphatedehydroge甘油醛一3一磷酸脱氢酶-nase，；highmobilitygroupbox一

6、1proteinmajorhistocompatibilitycomplexIG1ycosamin091ycans2高迁移率族蛋白1主要组织相容性复合I氨基聚糖温州医学院硕士学位论文新型全肝脏去细胞化流程及干细胞支架内分化的实验研究中文摘要目的：为了解决供体肝脏的短缺和免疫排斥反应这限制肝移植发展的两大主要问题，本研究试探求一种以去细胞化支架为基础的全肝脏三维灌流生物反应系统来诱导分化培养干细胞，最终朝着全肝脏再生的方向发展的途径。通过建立一种新型的去细胞化流程，完善的评价其去细胞化效果。将之与自行设计的全肝脏三维灌流生物反应系统结合，初步探索诱导分化培养干细胞的可行性。方法：本研究

7、采用以3％Triton—X100为主，辅助以SDS、酶学法、物理冻融法、高低渗法等方法的新型全肝脏去细胞化流程制作大鼠全肝脏去细胞化支架，进行大体组织学观察，免疫组化法检测支架的胶原蛋白，层粘连蛋白，纤粘连蛋白等细胞外支持基质的分布，电镜观察支架内部形态结构的状态，ELISA法检测HGF、VEGF细胞因子的含量，吸光度法检测氨基聚糖、总胶原蛋白及DNA的含量；与SF．Badylaketal去细胞化流程比较，Western—blotting法检测供体细胞组分