高效液相色谱串联质谱法测定牛奶中四环素类抗生素及其代谢产物

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1、第34卷分析化学（FENXIHUAXUE）研究报告第9期2006年9月ChineseJournaIofAnaIyticaIChemistry1255~1259高效液相色谱串联质谱法测定牛奶中四环素类抗生素及其代谢产物＊1211岳振峰邱月明林秀云吉彩霓1（深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心，深圳518067）2（中国检验检疫科学研究院检测新技术与装备研究所，北京100025）摘要建立了牛奶中四环素、金霉素、土霉素、强力霉素、去甲基金霉素、甲烯土霉素和二甲胺四环素等7种四环素类抗生素及差向四环素、差向金霉素、差向土霉

2、素等3种代谢产物多残留的液相色谱串联质谱同时测定方法。方法采用InertsiIC8-3（5!m，150mmX2.1mmi.d）反相色谱柱，以pH4.0的EDTA-McIIvaine缓冲溶液为提取溶液，以HLB固相萃取柱为净化柱，流动相为甲醇+0.01moI/L三氟乙酸（梯度洗脱），流速0.3mL/min，以正离子多反应监测模式测定，进样量30!L。方法的检出限为0.5~10!g/kg；测出限为50!g/kg；线性范围为50~1200!g/L，加标回收率为74.4%~101%，相对标准偏差为1.8%~8.3%。本方法具有

3、灵敏、准确、简便、快速等优点，适用于牛奶中四环素类抗生素及其代谢产物多残留的同时确证检测。关键词高效液相色谱串联质谱，四环素类，代谢产物，残留，牛奶!"引""言四环素类（tetracycIines，TCs）为广谱抗菌药，被广泛用作药物添加剂，用于预防和治疗畜禽疾病。但由于该类药物的使用不合理及滥用，容易诱导耐药菌株和导致在食品及牛奶中四环素类药物的残留［1］问题。欧盟及我国均规定牛奶中四环素类抗生素的最大残留限量为0.1mg/kg。常用的TCs有：四环素（tetracycIine，TC）、金霉素（chIortetrac

4、ycIine，CTC）、土霉素（oxytetracycIine，OTC）、强力霉素（doxy-cycIine，DC）、去甲基金霉素（demecIocycIine，DMCTC）、甲烯土霉素（methacycIine，MTC）和二甲胺四环素（minocycIine，MINO）等。另外，四环素、金霉素和土霉素还可在动物体内经代谢而转化为差向四环素（4-EpitetracycIine，ETC）、差向金霉素（4-epichIortetracycIine，ECTC）和差向土霉素（4-epioxytetracy-cIine，EOTC

5、），差向四环素类药物的药效极低或消失，但它们的毒副作用增加，已经被欧盟确定为四环［1］素、金霉素和土霉素的残留标识物。［1］［2］［3］［4~10］目前，TCs残留的测定方法主要有微生物法、酶联免疫法、薄层色谱法和液相色谱法，但这些方法存在特异性差的缺点。液质联用法由于具有特异性强和灵敏度高的特点，可用于四环素类［11］抗生素残留的确证分析。但当前国内外对四环素类多残留的液质联用检测方法的报道较少，未见关于同时检测四环素类抗生素及其代谢产物残留的文献报道。而国外已开始四环素类抗生素代谢产物残［12~14］留检测方法的研

6、究。本研究建立了牛奶样品中10种四环素类多残留的高效液相色谱/串联质谱确证方法，填补了国内外的技术空白，可为牛奶样品中四环素类药物及其代谢产物残留的监督检验和残留监控提供技术支持。#"实验部分#.!"仪器与试剂API3000型串联质谱仪，配AgiIent1100型高效液相色谱仪和电喷雾离子源；MinishakerMS1型旋涡混合器；UNIVERSAL32R型低温离心机；ZYMARKLV型吹氮浓缩仪；固相萃取真空装置（AgiIent公司"产），20孔；伏特pH510型pH计；OasisHLB固相萃取柱等。二甲胺四环素盐酸

7、盐（Sigma公司，纯度91%）、土霉素.2H2O（Sigma公司，纯度99%）、四环素（Sigma公司，纯度95%）、去甲基金霉素盐酸盐2005-01-11收稿；2006-05-22接受本文系科技部“十五”食品安全重大专项课题资助项目（No.2001BA804A18-12）1256分析化学第34卷图1四环素类抗生素的分子结构Fig.1Moiecuiarstructureoftetracyciines（Fiuka公司，纯度99%）、金霉素盐酸盐（Sigma公司，纯度80%）、甲烯土霉素盐酸盐（Riedei-deHaen

8、公司，纯度99.4%）和强力霉素盐酸盐（Fiuka公司，纯度98%）、差向四环素（Acros公司，纯度100%）、差向土霉素（Acros公司，纯度97%）、差向金霉素（Acros公司，纯度97%）；甲醇、乙腈和三氟乙酸为色谱纯试剂；其它试剂均为分析纯试剂；水为高纯水。0.1moi/LEDTA-Mciivaine缓冲溶液：称取柠檬酸