体外RNA干扰下调PTEN表达对活化肝星状细胞FAK_p130Cas及paxillin信号转导的影响

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1、中图分类号：R575.2论文编号：2017307080UDC：密级：公开硕士学位论文体外RNA干扰下调PTEN表达对活化肝星状细胞FAK/p130Cas及paxillin信号转导的影响作者姓名：刘博学科名称：内科学研究方向：消化系统疾病学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2017年4月18申请学位类别：临床医学硕士导师姓名：郝礼森主任医师单位：华北理工大学附属医院论文评阅人：康喜荣主任医师单位：河北省人民医院高俊茶主任医师单位：河北省人民医院论文答辩日期：2017年5月27日答辩委员会主席：陈乃耀关键词：肝纤维化；肝星状细胞；第1

2、0号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因；RNA干扰；黏着斑激酶；p130Crk相关底物蛋白；桩蛋白唐山华北理工大学2017年6月InfluencesofPTENDown-regulationbyRNAInterferenceonFAK/p130CasandPaxillinSignalTransductioninActivatedHepaticStellateCellsinvitroDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfil

3、lmentoftherequirementforthedegreeofMasterofClinicalMedicinebyLiuBo(InternalMedicine)Supervisor:M.D.HaoLisenJune,2017独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明

4、并表示了谢意。论文作者签名：日期：2017年5月31日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：2017年5月31日签字日期：2017年5月31日摘要目的探讨第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(phosphat

5、aseandtensinhomologydeletedonchromosomeTen,PTEN)表达下调对体外培养的活化肝星状细胞（hepaticstellatecells,HSC）黏着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)/p130Crk相关底物蛋白(p130Crk-associatedsubstrate,p130Cas)及桩蛋白(paxillin)信号转导的影响。方法体外培养活化大鼠肝星状细胞系HSC-T6，利用转基因及RNA干扰技术，将载有靶向PTEN的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)片段并

6、同时表达绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein,GFP）的重组腺病毒（Ad-shRNA/PTEN）瞬时转染HSC-T6，下调PTEN表达，体外构建活化HSC的PTEN低表达模型；采用Westernblot技术检测活化HSC的PTEN、FAK、磷酸化FAK（Tyr397）［phosphorylatedFAK(Tyr397),p-FAK（Tyr397）］、p130Cas、paxillin的蛋白表达；应用实时荧光定量PCR技术测定活化HSC的PTEN、FAK、p130Cas、paxillin的mRNA表达。采用SPSS21.

7、0统计软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，组间比较采用LSD检验，P＜0.05示差异有统计学意义。实验分组：①Control组：以纯DMEM替代腺病毒液；②Ad-GFP组：转染空病毒Ad-GFP；③Ad-shRNA/PTEN组：转染重组载腺病毒Ad-shRNA/PTEN。结果1将腺病毒以转染倍数（Multiplicityofinfection,M.O.I.）为100转染体外活化HSC，转染后48h计数GFP阳性表达的细胞数，测得Ad-GFP、Ad-shRNA/PTEN转染效率均大于80

8、%。2腺病毒感染HSC后48h，采用实时荧光定量PCR技术检测3个组HSC的PTENmRNA表达，以Control组PTEN的mRNA表达量为1，则Ad-GFP组和Ad-shRN