干扰素α对PDGFBB刺激肝星状细胞分泌ECM及TGFβ1表达影响的研究

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1、·英文缩略语·7中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：二幽丰耻日期：o鲴鞫‘乃围中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究．生在攻读学位期间论文工作

2、的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：日期：·中文论著摘要·干扰素一仅对PDGF—BB刺激肝星状细胞分泌ECM及TGF—Bl表达的影响目的肝纤维化是多种病因导致慢性肝病共有的病理改变，肝纤维化的显著特征是细胞外基质(Extracellularmatrix，EC

3、M)的增加和成分的改变。目前研究表明，肝星状细胞(HSC)的活化和增殖是肝纤维化形成的关键和中心环节‘M】。HSC具有生成ECM，分泌细胞因子以及收缩等多种功能，在肝硬化、门静脉高压症的发生发展中起了关键性的作用‘4卅。近年来的研究表明，细胞因子在肝纤维化形成中发挥重要的作用，以转化生长因子-13fftransforminggrowthfactor-131，TGF．131)的促纤维化生成作m最；虽t7j；血小板衍生生长因子(platelet．derivedgrowthfactor,PDGF){

4、乍为HSC的强有力的促有丝分裂原，可促进HSC分裂、增殖和活化静息状态的H

5、SC激活为成纤维母细胞合成大量ECM，在肝纤维化形成和发展过程中起着重要的作用。ECM包括胶原、非胶原糖蛋白以及蛋白聚糖，主要以胶原为主。正常情况下HSC分泌的胶原以III、IV型胶原为主，仅合成少量的I型胶原。在肝脏损伤时，HSC被激活，合成大量的以I、III型胶原为主的ECM[81。I型胶原可促进HSC激活、增殖，并抑制肝细胞及窦内皮细胞的增生，促进肝纤维化的发展【9】o目前干扰素．0【(IFN．0【)作为抗病毒的药物已应用于肝炎的临床治疗中。但对于IFN．0【的抗肝纤维化的机制尚不完全清楚。本研究通过观察IFN．a对于PDGF．BB刺激体外培养的HSC分泌I型胶

6、原(C01．I)及TGF．pl表达的影响，以期阐述IFN．仅抗肝纤维化的部分作用机制，为临床肝纤维化的药物治疗提供更多的理论依据。材料与方法一、实验材料1、大鼠肝星状细胞株(r-HSC99)中国医科大学附属盛京医院感染科研究室提供。2、主要试剂重组人干扰素-0【2b(IFN-a2b)(Prospee公司)；血小板衍生生长因子．BB(PDGF-BB)(PeprotechAsia公司)：MTT(武汉博士德生物公司)；DMEM高糖培养液、胎牛血清(美[]Gibeo公司产品)；琼脂糖(Sigma公司)；酶标仪(LabsystemsDragon公司)；TrizolRNA提取试剂

7、盒(Invitrogin公司)；RT—PCR试剂盒、13-actin弓I物、I型胶原(Col-I)引物、转化生长因子131(TGF．p1)引物(大连宝生物工程有限公司)；DNAmarker(MBI公司)。二、实验方法体外培养大鼠肝星状细胞系rHSC．99，分别用不同浓度的IFN．a、PDGF．BB干预和两者共同干预，用四甲基偶氮唑蓝实验(MTT)观察各组对HSC增殖的影响，采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定各组对HSC细胞C01．ImRNA和TGF．131mRNA表达的影响。三、统计学处理应用SPSSVl3．0统计软件进行分析，数据以均数4-标准差表示，各

8、组之间是否存在显著性差异分析采用One．wayANOVA分析，LSD．t检验。以P<0．05为差异有统计学意义。实验结果1、MTT检测结果分别用不同浓度的IFN—a(o．4、0．2、O．1、0．05、0．025、0．0125ng／m1)，20ng／mlPDGF-BB及不同浓度的IFN-0【(0．4、0．2、O．1、O．05、0．025、0．0125ng／m1)+20ng／mlPDGF—BB作用于HSC，并设对照组，应用MTT法检测吸光度值(A值)，经方差分析，20ng／mlPDGF-BB组及(0．4、O．2、O．1、0．05ng／m1)IFN一0【+