5-HT诱导肝癌细胞自噬及其机制的初步研究

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1、分类号：S859.1单位代码：10183研究生学号：2015852040密级：公开研5-HT诱导肝癌细胞自吉林大学噬及其硕士学位论文机制的（学术学位）初步5-HT诱导肝癌细胞自噬及其机制的初步研究研究5-HT-inducedHepatomaCellAutophagyandItsMechanisms作者姓名：李树林李树专业：兽医公共卫生林研究方向：人兽共患病吉指导教师：于录教授林大培养单位：动物医学学院学2018年6月5-HT诱导肝癌细胞自噬及其机制的初步研究5-HT-inducedHepatomaCellAutophagyand

2、ItsMechanisms本研究由吉林省科技发展计划项目、吉林省教育厅项目和深圳市科学技术创新委员会项目资助（项目编号：）No.20150101108JC、No.2016444和No.JSGG20160301100442775TheresearchwassupportedbyJilinProvinceScienceandTechnologyDevelopmentPlanProject,JilinProvincialDepartmentofEducationProjectandShenzhenScienceandTechnolog

3、yInnovationCommitteeProjectFoundationofChina（No.）No.20150101108JC、No.2016444和No.JSGG20160301100442775作者姓名：李树林专业名称：兽医公共卫生指导教师：于录教授学位类别：农学硕士答辩日期：2018年6月7日中文摘要5-HT诱导肝癌细胞自噬及其机制的初步研究自噬是真核生物中高度保守的细胞内降解途径，是一个对大多数细胞至关重要的分解代谢过程，它对通过循环细胞质成分在应激条件下维持细胞稳态和细胞存活起到至关重要的作用。自噬是细胞内最重要的

4、蛋白质降解途径之一，可以促进消除大部分的异常蛋白质、多余或损伤的细胞器乃至整个生物体。巨自噬、微自噬和分子伴侣介导的自噬是自噬最基本的三种类型。它们发生的机制和功能是不同的。我们目前所说的自噬是巨自噬，它以能够形成称为自噬体的双层膜囊泡为最显著的特征。能够诱导自噬的因素有很多，例如化学药物雷帕霉素、缺氧和营养饥饿等。与酵母细胞中的自噬相比，哺乳动物细胞中的自噬是一个异常复杂的生理过程，涉及抗原递呈、病原清除、细胞应激、生存、衰老和死亡等过程。现代研究表明，自噬与包括自身免疫性疾病、肌营养性疾病、帕金森病、心血管疾病、衰老和癌症等

5、多种疾病的发病机制有关。虽然自噬与这些疾病的关系还没有研究透彻，但是自噬作为治疗多种疾病的靶标已成为当前的研究热点。5-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）是人体中枢神经系统中的一种单胺类神经递质、肠道中的局部介质和血液中的血管活性剂。色氨酸、镁、锌和脂肪酸等营养物质参与5-HT的合成。5-HT能够影响人的情绪、睡眠和食欲等。人体内的5-HT通过与相应的受体特异性结合从而发挥作用，目前已有7种5-HT受体亚型被发现。已有研究表明，5-HT通过5-HT1和5-HT2受体在侵袭性癌症和类癌中表现出生长刺激作用。

6、选择性5-HT转运蛋白抑制剂、5-HT受体拮抗剂和5-HT合成抑制剂已成功用于预防癌细胞生长等方面。另有研究表明，ROS能够诱导癌细胞自噬[1]，且ROS在癌症的发生、转移等方面发挥着非常重要的作用。基于自噬、ROS和5-HT均与癌症的密切联系，5-HT能否诱导癌细胞自噬已经成为一个值得研究的问题。本文以HepG2和Hep3B细胞为模式细胞，对5-HT能否诱导肝癌细胞自噬及可能的机制进行初步研究。首先，我们建立了带有GFP-LC3质粒的HepG2和Hep3B细胞系，用不同I浓度的5-HT处理不同时间后，在荧光显微镜下观察HepG

7、2和Hep3B细胞的GFP-LC3荧光斑点；利用westernblot技术检测HepG2和Hep3B细胞中自噬标志蛋白LC3和p62的表达情况。结果显示，5-HT均能够诱导HepG2和Hep3B细胞内GFP-LC3斑点增多，而且我们明确了5-HT对自噬的最佳诱导浓度和最佳诱导时间；5-HT能够显著增强HepG2和Hep3B细胞中LC3蛋白的表达量和p62蛋白的降解。其次，我们用westernblot技术检测了不同浓度的5-HT处理不同时间后HepG2和Hep3B细胞内自噬相关蛋白mTOR、4E-BP1、p70S6K、AMPKα、

8、AMPKβ、ERK、p38、JNK、ULK1蛋白的磷酸化水平。利用westernblot分析了用PD98059（ERK抑制剂）、SP600125（JNK抑制剂）和SB203580（p38抑制剂）预处理，5-HT处理后HepG2和Hep3B细胞内的ERK、JNK和