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《伪狂犬病病毒UL24基因的原核表达及抗UL》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第35卷第9期西北农林科技大学学报(自然科学版)Vol.35No.92007年9月JournalofNorthwestA&FUniversity(Nat.Sci.Ed.)Sep.2007伪狂犬病病毒UL24基因的原核表达及抗UL243蛋白抗体的制备于春梅,李鹏,郑其升,李斐,苏鑫铭,曹瑞兵,周斌,陈溥言(南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏南京210095)[摘要]为了给伪狂犬病病毒(PrV)UL24蛋白的细胞定位和功能研究提供参考依据,据GenBank公布的PrVUL24基因序列(登录号NC006151)设计1对引物,以质粒p
2、UL242GFP为模板,用PCR方法扩增出部分缺失的基因片段mUL24(modifiedUL24)。将mUL24片段定向克隆到原核表达载体pET232a(+)中,构建融合表达载体pET2UL24。阳性质粒转化宿主菌E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导,重组蛋白(His)62UL24以包涵体的形式获得表达。用纯化后的pET2UL24融合蛋白免疫家兔,ELISA分析表明,在血清效价达到1∶2560以上,Western2blot分析制备的抗体可以和pET2UL24表达产物发生反应,具有良好的免疫特异性。[关键词]伪狂犬病毒;UL24基因;原核表达;抗体制
3、备[中图分类号]Q786[文献标识码]A[文章编号]167129387(2007)0920010205ProkaryoticexpressionandantibodypreparationforthePseudorabiesvirusUL24proteinYUChun2mei,LIPeng,ZHENGQi2sheng,LIFei,SUXin2ming,CAORui2bing,ZHOUBin,CHENPu2yan(KeyLaboratoryofAnimalDiseaseDiagnosisandImmunologyNanjingAgriculturalUnive
4、rsityNanjing,Jiangsu210095,China)Abstract:FromrecombinantplasmidpUL242GFP,thePrvUL24genewasamplifiedwithapairofspecificdesignedprimersaccordingtotherelevantnucleotidesequenceonGenBank(NC006151).ThemUL24genewiththeclusteredrareconclousforE.coliatthe3′and5′endwasdirectlyclonedintothe
5、PEF232a(+)togetarecombinantplasmidpET2UL24.ThepET2UL24plasmidwastransformedintoBL21(DE3)cellsandtherecombinantprotein(His)62UL24wasexpressedintheformofinfusionbodywhenin22+ducedwithIPTG.TargetproteinwaspurifiedwiththeNi2NTAHis·BindPurificationKit.Thepurifiedpro2teinwasusedtoimmuniz
6、erabbitsandtheserumwascollectedwhentheserumantibodytiterreached1∶2560.Keywords:pseudorabiesvirus;UL24gene;prokaryoticexpression;antibodypreparation伪狂犬病(Pseudorabies,PR),又称Aujeszky是本病的原发感染宿主,又是病毒的长期储存和排[2]氏病,是由疱疹病毒科α2疱疹病毒亚科的伪狂犬病毒者,PR现已成为养猪业的主要疫病之一。病毒(PseudorabiesVirus,PrV)引起的发热、奇痒及目
7、前,伪狂犬病病毒的基因组测序已经完成,其脑脊髓炎为主要症状的急性传染病,可感染多种家中的72个基因被定位,编码70种不同的蛋白。被[1]畜和野生动物,被世界动物卫生组织(OIE)列为B发现或假设其产物存在于成熟PrV粒子中的基因类传染病,为畜产品进出口贸易必检项目之一。猪有31个,其中15个的功能仍不清楚,UL24基因便3[收稿日期]2006208204[作者简介]于春梅(1981-),女,山东荷泽人,硕士,主要从事畜禽传染病防制研究。[通讯作者]陈溥言(1942-),男,江苏南京人,教授,主要从事动物传染病与分子病毒学研究。E2mail:aid@njau.
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