伪狂犬病病毒ge基因主要抗原表位区的原核表达及其在疫苗接种和自然

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1、!"卷#期生物工程学报%&’(!")&(#!""#年$月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12*+’,!""#!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!伪狂犬病病毒!"基因主要抗原表位区的原核表达及其在疫苗接种和自然感染鉴别诊断中的应用倪健强张春玲""童光志"仇华吉王云峰田志军（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，哈尔滨/3"""/）摘要根据伪狂犬病病毒（FG%）H;?.2株<9基因序列，利用FIG方法扩增

2、了FG%<9基因不含信号肽、胞内区和跨膜区的主要抗原表位区，并克隆到原核表达载体AJ9K.1A./中，获得的重组质粒命名为AJ9K.><9。经LML.F2J9电泳分析证实克隆的部分<9基因获得了表达，融合表达产物大小约为1-NM，并在终浓度为"O1::&’PQ的RF4J诱导下，-O3D其表达量达到高峰。通过改变诱导条件，有效抑制了包涵体形成，提高了重组蛋白的溶解性。S5T>5E?B’&>分析证实表达的重组<9蛋白具有抗原反应活性。将表达产物利用亲和层析法纯化后作为9QRL2抗原，通过对其特异性、敏感性及工作条件的优化试验，和对#0

3、份FG%阴性血清样品的检测结果的统计学分析，建立了猪伪狂犬病><9.9QRL2鉴别诊断方法。通过对#""份送检血清样品的检测结果分析，表明其与FG%全病毒9QRL2试验的符合率高达U3V以上，与基于抗<9蛋白单抗竞争性9QRL2的符合率达U#V。此方法可用于<9基因缺失FG%疫苗免疫动物和FG%自然感染动物的鉴别诊断。关键词FG%，<9，鉴别诊断中图分类号W$01文献标识码2文章编号/""".-"1（/!""#）"#."3!1."1伪狂犬病（AT5+X&E7B;5T，FG）是由伪狂犬病病毒国、欧盟等许多国家或地区先后宣布了根除计划

4、的［#Y3］（FG%）引起的家畜和多种野生动物共患的一种急性成功。传染病。伪狂犬病病毒属疱疹病毒科!疱疹病毒亚目前，伪狂犬病在我国猪群中广泛流行，<9基科成员，主要贮主为猪和鼠。除猪外，其他易感动物因缺失的弱毒疫苗也已广泛使用，但单纯使用疫苗感染本病为高度致死性感染，但呈散发形式。该病并没有从根本上解决问题。因此，能有效区分野毒对猪危害严重，主要引起种猪不育、妊娠母猪流产、感染猪和疫苗免疫猪的鉴别诊断技术是最终根除伪死产和产木乃伊胎；新生仔猪和断奶仔猪大量死亡；狂犬病的关键。据对上百株FG%的分析证明FG%［1］育肥猪增重减慢等症

5、状。伪狂犬病呈全球性分布流野外分离毒株均含有<9基因且较为保守，表明行，在我国伪狂犬病已蔓延至许多省市，给畜牧业造<9蛋白是建立鉴别诊断的理想标志蛋白。目前，在［/］成巨大的经济损失。长期以来，对伪狂犬病防制一些发达国家使用的是基于抗<9蛋白单克隆抗体的主要措施是接种疫苗。上世纪0"年代末，基因缺的竞争性9QRL2鉴别诊断试剂盒，价格昂贵，在我国［$］失标记疫苗及相应的弱毒疫苗免疫和野毒感染鉴别很难推行。我国冉智光等曾经建立FIG鉴别诊诊断技术相继问世并得到应用，使猪伪狂犬病的根断技术，但在实际应用时很难掌握。因此，本实验利［!Y

6、-］除成为可能。U"年代初期，部分伪狂犬病流行用克隆表达的FG%主要抗原活性区作为抗原建立国家正式启动本病的根除计划。即在使用疫苗防制了FG%鉴别诊断技术，不仅拥有自主知识产权，而本病的同时，配合以适当的鉴别诊断方法诊断出野且对我国根除伪狂犬病具有实际意义。毒感染猪，对已感染野毒的猪进行扑杀淘汰，从地区性净化猪场直至全国性根除本病。目前，荷兰、美收稿日期：!""-.//.!"，修回日期：!""#."!.!-。基金项目：国家高技术研究发展计划（01-计划）资助（)&(!""/22!/-"3/）。"通讯作者。45’：01.#3/.0!

7、$-#/0/；678：01.#3/.0!$-#/0/；9:7;’：<=>&?<@A+B’;C(DE(D’(C?""现在上海市农业科学院畜牧兽医研究所。S期倪健强等：伪狂犬病病毒?’基因主要抗原表位区的原核表达及其在疫苗接种和自然感染鉴别诊断中的应用C.E!材料与方法!"!病毒和血清!"#闽$毒株，由中国兽药监察所提供；伪狂犬病阳性血清和阴性血清由本室保存；抗流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪轮状病毒、传染性胃肠图+?’蛋白结构示意图（箭头所指为引物扩增区域）炎病毒、细小病毒、流行性腹泻病毒、大肠杆菌、猪丹X:?Y+274:IIO

8、6A58A:;=;Z?’%5;A4:=毒和猪瘟病毒阳性血清由中国农业科学院哈尔滨兽（A748548W4A[44=A[;855;[6[86