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1、猪伪狂犬病病毒GZ-Z1株gE基因原核表达质粒的构建贵州农业科学2011,39(11):149～152GuizhouAgriculturalSciences[文章编号31001—3601(2011)11-0699—0149—04猪伪狂犬病病毒GZ—Z1株gE基因原核表达质粒的构建曾智勇,周莉,汤德元,刘志杰,梁海英.,李谦,肖超能,王彬,王凤,甘振磊(1.贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;2.贵州省动物疫病研究室,贵州贵阳550025;3.贵州大学教学实验场,贵州贵阳550025)[摘
2、要]为给猪伪狂犬病病毒的诊断及防治提供科学依据,参考GenBank中猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因序列,设计1对特异性引物,以PRVGZ—Z1株DNA为模板,进行gE基因的PCR扩增,扩增产物与pMD18一T载体连接,鉴定正确后,再亚克隆至pET32a(+)原核表达载体中,经鉴定后测序.结果表明:目的片段为PRVgE基因完整开放阅读框,大小1734bp,编码577个氨基酸,在pET32a(+)载体中位置正确,表明,pET32a—gE原核表达质粒构建成功.该基因与国内外其他l8株PRV的gE基因
3、推导氨基酸序列同源性为94.8%～98.6%;与国外分离株属同一个进化分支,遗传关系相对较近;而与国内Fa,Min,GDSH等毒株亲缘关系较远.[关键词]伪狂犬病病毒;gE基因;克隆;原核表达质粒[中图分类号]$852.651[文献标识码]AConstructionofProkaryoticExpressionPlasmidofgEGeneofPRVGZ—Z1StrainZENGZhi—yong,ZHOULi,TANGDe—yuan,LIUZhi-jie,LIANGHai—ying.,LIQia
4、n,XIAOChao—neng,WANGBin,WANGFeng,GANZhen—lei(1.CollegeofAnimalScience,GuizhouUniversity,Guiyang,Guiyang,Guizhou550025;3.TeachingExperimentFarm,Guizhou550025;2.GuizhouAnimalDiseaseLaboratory,GuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025,China)Abstract:ThegE
5、genewasamplifiedbyPCRtechnologytakingDNAofPRVGZ-Z1strainasthetemplatebasedonapairsofspecificprimers.ThentheamplifiedproductwasIinkedwithpMD18一Tvector.Finally,theidentifiedamplifiedproductwasclonedintothepET32a(+)prokaryoticexpressionvector.Thesequenc
6、ingresultsshowedthatthegEgenewithanintactopenreadingframe,1734bpand577aminoacidswasinthepET32a(+)vectorcorrectly,whichindicatedthatthepET32a—gEprokaryoticexpressionplasmidwasstructuredsuccessfully.ThehomologyofaminoacidsequencebetweengEgeneandotherl8
7、PRVstrainsfromhomeandabroadwas94.8%～98.6andthegEgeneofPRVGZ—Z1strainandforeignisolatedstrainsbelongedtothesameevolutionbranch.TherelationshipbetweenthegEgeneofPRVGZ—Z1strainanddomesticFa,MinandGDSHstrainswasveryfar.Keywords:pseudorabiesvirus;gEgene;c
8、loning;prokaryoticexpressionplasmid猪伪狂犬病(porcinepseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(猪疱疹病毒I型,PRV)引起的一种危害严重的急性传染病,主要以新生仔猪的急性死亡以及4周龄以上仔猪出现神经症状,妊娠母猪以繁殖障碍,流产,死胎及呼吸道症状为特征I1].具有传播快,死亡率高,流行广泛,传播途径多,病原体顽固等特点,对世界畜牧业产生了极大的危害,其危害程度仅次于猪瘟和口蹄疫,且很难根除,已成为世界各国检疫和防疫的重点对象j.PRV基因组为
