伪狂犬病病毒贵州分离株gE基因主要抗原表位区真核表达研究.pdf

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1、山地农业生物学报32(6)：484～488，2013JournalofMountainAgricultureandBiology伪狂犬病病毒贵州分离株gE基因主要抗原表位区真核表达研究郝飞，汤德元，李春燕，曾智勇，罗险峰(1．贵州大学动物科学学院，贵州贵阳550025；2．贵州省动物疫病预防控制中心，贵州贵阳550008)摘要：收集贵州省思南县某猪场送检的哺乳仔猪病料，采用Vero细胞盲传、核酸鉴定及测序分离到1株伪狂犬病病毒贵州分离株。扩增其gE基因主要抗原表位区，构建pcDNA3．1(+)一gE重组真核表达质粒，将其转染Ve—ro细胞，采用间接免疫荧光(IFA)检测基因

2、在Vero细胞中的表达，同时将重组质粒免疫BALB／c小鼠，进行免疫学评价。结果表明：基因主要抗原表位区在Vero获得瞬时表达，转染的Vero细胞呈特异性绿色荧光；将构建的重组真核表达质粒免疫BALB／c小鼠，经间接ELISA和T淋巴细胞亚群含量测定表明，重组质粒具有较好的免疫原性。关键词：伪狂犬病病毒；贵州分离株；真核表达中图分类号：S852．659．1文献标识码：A文章编号：1008—0457(2013)06—0484—05EukaryoticExpressionofMainEpitopeDomainofgEgeneofPRVGuizhouIsolateHAOFei，T

3、ANGDe—yuan，LIChun—yan，ZENGZhi—yong。，LUOXian-feng(1．CollegeofAnimalSci—ence，GuizhouUniversity，Guiyang550025，GaizhouProvince，P．R．China；2．AnimalDiseasePreventionandControlCenterinGuizhouProvince，Guiyang550008，GuizhouProvince，P．R．China)Abstract：Apseudorabiesvirus(PRV)strainwasisolatedfrompigle

4、tsinSinanCounty，GuizhouProvince．ToevaluateimmuneresponsesofthemainepitopedomainofPRVgE，therecombinantplasmidofpcDNA3．1(+)一gEwasconstructedandtransfectedintoVerocells．TheexpressionofmainepitopedomainofgEwasidentifiedbyindirectimmunofluorescentassay．TheresultsshowedthatmainepitopedomainofgEw

5、astransientlyexpressedinVerocellsandtheproteinexpressedinVerocellshadgoodreactogenicity．Fur—thermore，BALB／cmicewereimmunizedbypcDNA3．1(+)一gE．IndirectELISAanddeterminationofTlymphocytesubsetsshowedthattherecombinantplasmidwasefficientlyabletoinduceimmuneresponsesininoculatedmice．Theobtained

6、evidencesfacilitatedthefurtherresearchonDNAvaccineagainstPRV．Keywords：PRV；Guizhouisolate；Eukaryoticexpression猪伪狂犬病(PR)又称Aujeszky氏病，是由伪狂犬病病毒(猪疱疹病毒1型)属于疱疹病毒目疱狂犬病病毒(PRV)引起的多种家畜和野生动物以疹病毒科仅一疱疹病毒亚科水痘病毒属双股线发热、奇痒(猪除外)及脑脊髓炎为主要症状的一性DNA病毒，基因组大小约150kb，具有疱疹病毒种急性传染病。该病属于典型且极难防疫的自共有的一般形态特征，现已被广泛用于研究疱疹病然疫

7、源性疾病之一，且易与其他疫病混合感染，给毒侵袭机制和形态发生的模型。PRV含有11养猪业造成的损失仅次于猪瘟和口蹄疫I4J。伪种糖蛋白，分别为gB、gC、gD、gE、gG、gH、gI、gK、收稿日期：2013—07—15；修回日期：2013—09—24基金项目：贵州省科学技术基金项目“猪呼吸道病毒性疫病新型特异诊断技术多重PCR检测的研究”[黔科合J字(2013)2l1O号]；贵州省2011年农业攻关项目“贵州省规模化猪场主要病毒性疫病的调查及综合防控对策的研究与示范”[黔科合NY字(2011)3103号]；贵州省