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时间:2019-05-15
《骨髓基质干细胞定向诱导分化和构建组织工程化周围神经》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中山大学博士学位论文骨髓基质干细胞定向诱导分化和构建组织工程化周围神经姓名:侯赛云申请学位级别:博士专业:外科学指导教师:朱家恺2003.5.15串垂尖擎{蠢量穗筵静蘸萋震卡瓣耱建海诱导分佬鞫橡建薅默王栏纯瓣圈毒隼缎串变纂羹骨髓基质千细胞定向诱导分化和构建组织工程化周围神经专鼗:乡}科学博士研究生:侯赛云导师:朱家恺教授攘要【强骢】.澜爨享串经损揍蓐囊豁神经移辍是繁选豹神经燕建方法,魏卷在着供体来源受限、供送感徽、运动鹚熊障礴、手术孵阕延长鲍缺点,难毅瀵题长段缀糕太毒搴经缺援豹簧求。露雾髂狰经、纛譬、交健嚣骆莲臻、羚辣搂纛囊鳞嚣戆飘等移植髂也狻矮袋辨攘天鬣整譬弹经缺袋,餐效袋甥不嚣久塞。避筝来
2、,遮羞缎织誓程学鹣兴起和发震,缀缀工稷纯瘸戮神经邑艘鸯两溺神经戮究率静一个薪课题,它其蠢不受供体来源袋涮、壤掇需婺隧蠹鹫形释恢凝神经葫貔豹徒淼。戮镰的研究郝将许旺细臆作为释予细胞,僵由予鑫体来源的许旺细胞有隈且器二次手寒,异体豹
3、年珏缁藏其鸯免疫摊斥疑应,辩既将入王神缀斑鳎予l琏臻的磷究暹虱了难以逾越瓣艇颈。近颦爰芝的研究发现,臂髓基质子细胞具有予缓臆的特髅,商多翔分戴豹潜能,爵以被诱罨分化袋各秘鬻究质缓织豹缨溅,包戆壤鸯缎腮、软器缨躯、脂肪纲臆、成飘绷藏等,逐霹璇被诱导分像成非瓣充袋缠织的绷臌,翔摊缀元、箨经黢壤鬃蕤、诲鹾缨藏梅实验穗迓交蘩夫鬣嚣疆基爱千缨魏遴行钵辨分离壤养秘诱等分铯必类谗黩
4、纲熬,与ECM凝黢修镰过戆PLGA纾维体终复会臻养后,稀穰子爵啜收斡离分子褥籽PLGA管来梅建暴露诲疆纲臆瓣往瓣缀缓王耩张周戮棒经移疆体,穆簸遥交系太鬣lOmm长艇静神经款损。鼍驽究这荦牵入工神经移植体的修复效采,为外周{审经缀织工程的避一步研究和临床应用捷供释予细瓞柬滋。,/【方法】t1.嚣懿鏊璇手续熬熬生耱学黪矬联究率出炙擎懈玉睦空静赫基爨平绷腿定国诱爵分亿鞠梅蘸缀簸工程纯瓣圈神经串室羹羹l,l营髓基纛予甥魏豹髂穸}分离培养褒l令嚣龄志褰戆邋交系F344大聚豹澉馕黢鸯窝骚餐,穆葵涎装予鼗溃惦豫,显嚣鸯髓骏,狰涟费麓腔,分离骨懿纂霞予缀藤,传代莠扩缮。1.2雷髓蒸矮予绷魏的篷长蘧线溅定取生长
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6、鞠点豹缨魏赔蹩率,绘测魏线图。l+5诲旺缨胞的体步}分穗壤养熄戥二及鉴定鞭3~?d龄F344避交系大惑豹双侧坐.鼙耪缓期鹫麸耪经,分亵缝徽谗延缨臌,擞S-100蛋鑫受疫纲艨纯学染魏。2。嚣囊鏊痰予鬃藏豹体舞诱导势豫努类诲狂续缒瓣实验磺究2.1馨耩蒸震予缀藤匏体箨诱嚣分铯嚣髓基质子细藏这弼噩融合话,按顺序分掰加入13m巯蘩乙醇,全菠式褫莛酸,Forskolin,虢裢成好绒细胞警长因予,盘小缀源毪燕妖因予,HRG避行诱簿分化,溉察纲胞形态。2+2经诱黪多}纯麓靛类诲旺缀骢的GFAP、S--100免疫缒您化学染色露艇SABC法染色,DAB鼹色,脱水、透暖、封片。光镱下观察,照握,麓援记数200令缨爨
7、,耱葵辍梭缨熬数瓣。2,3经瀵罨分纯豢豹樊谨菠缨瓣戆S.100、GFAP徽量爨自表达采鬻Western窜迹法检溅,编薅蛋鑫麓解彀集,超声,毫泳,转簇,辩藤,笈巍,X光舞惑始、显影、定影,获片遂行强象分辑。审由天学蹲溉§文鬻羹蒌委苄鳕稳定l麓诱毒分纯稻拇建瓣绞工程讫周匿{每缎睾交羹囊3。经诱鼯分强熬嚣蘧基鹱子缨熬应用予缝织工凝化周爨神经的炭骏磷究3.1经诱导分化的骨髓基质干细胞与商分子材料的体外构建PLGA纾维缀生物穆聿錾惹,器穆缨稳懋滚接静子其上。珞养4-5天鑫,藏入PLGA中空管,这样就可获得三维方向均贴附有活性的经诱导分化的骨髓基质干细胞的组织工程纯周围神经。许旺缁隗作为对照。通过竞镜和扫
8、攒电镜蘸察细胞的生长和糨附情况。3.2组织工程化周围神经的体内植入取雄投F344成年大藏29只,重200毙左右。寒酸,在无蘸条{孛下暴簇右下肢坐骨神经全长,造成10ram的神经缺掇。随机分成4缀,每组7只。A组经诱导分纯髭戆嚣髓基瑗予纲/建+PLGA终维+ECM+PLGA警;B缀诲贬缨戆+PLGA纤维+ECM+PLGA管;C组PLGA纤维+ECM+PLGA管;D组融体神经移植。3.3术后12周,组
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