水稻种子蛋白启动子驱动下的ipt基因在转基因烟草中的特异表达

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1、广西大学硕士学位论文水稻种子蛋白启动子驱动下的ipt基因在转基因烟草中的特异表达姓名：申佩弘申请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：武波2003.5.1水稻种子蛋白启动子驱动下的枷基因在转基因烟草中的特异表达摘要本研究首先利用PCR法获得了水稻种子专一性表达启动子(醇溶蛋白启动子与谷蛋白启动子)，将两启动子插入到植物表达载体pBll21上35S启动子的位置，构建了醇溶蛋白启动子与谷蛋白启动子驱动下的gus基因植物表达载体；随后用ipt基因取代gus基因，分别构建了醇溶蛋白启动子与谷蛋白启动子以及CaMV35S启动子驱动下的ipt基因的植物表达载体。将上述嵌

2、合基因经过三亲结合法，把重组质粒及原始载体pBIl21导入根癌农杆菌(LBA4404)中，获得了分别含有上述六种质粒的农杆菌菌株，用于普通烟草的转化。将含外源基因的根癌农杆菌菌液与烟草幼叶共培养，并进一步继代和抗生素筛选获得相应的抗性植株。Gus组织染色表明Pp与Pg均有种子特异表达活性。通过PCR测序分析，证实外源ipt基因已经整合到烟草植株的基因组中。利用ELISA检测转基因植株种子中的WAs(异戊烯基腺苷与异戊烯基腺嘌呤)的含量发现，转基因烟草种子中的iPAs的含分别增加了4．17和2．43倍。通过对种子重量分析发现转基因种子的重量与对照相比分别提高了

3、12．14％和7．8％。关键词：ipt基因j水稻醇溶蛋白启动子j水稻谷蛋白启动予iPAs细胞分裂素种子劫种子重量AN，P7-GENEDRIVENUNDERTHERlCEENDOSPERM—SPECIFICPROMOTERSEXPRESSEDlNTRANSGENICTOBACCOPLANTSABSTRACTThericeendosperm—specificexpressingpromoteLprolaminpromoterandglutelinpromoterwereclonedfromricetotalDNAbyPCR，thesetwopromotersfu

4、sedtothebeta-glucuronidase(GUS)repotergeneinbinaryexpressionvectorpBll21respectively,namedpBDandpBIG；then，weused／ptgenewhichwasisolatedfromA．tumefaciensrepresentedthegusgeneofthevectorspBD、pBIGandpBll21，namedpBIPI、pBIGIandpBl35I，Asthis，weobtainedfiverecombinedvectorsThesevectorswer

5、eintroducedintotobaccoplantsbytheAgrobacteriummediatedleaf-diskmethod．Aftertransformation，someplantswhichcangrowupintheKmselectivemediumidentifiedbyPCRhavetheaimband，andsequenceanalysisconformedthatthefusedgeneshaveintegratedintothegenomesoftobaccoplants．Histochemicalanalysisreveal

6、edthattheGusactivitywasrestrictedtotheendospermtissue．CytokininlevelinseedswasdeterminedbyELISAkit，theresultshowedthattheiPAslevelintransgenicseedswereincreasedbyabout4．17and2．43foldoftheCK(contr01)，the研genedrivenunderthericeendosperm-specificpromotershavespecificexpressedinthetran

7、sgenictobaccoplants．Furthermore，statisticalcomparisionbetweenthetransgenicplants’andCK’seedsweightindicatedthatthetransgenicseedsareheavier1214％and78％thanCK’Keywords：iptgene；riceprolaminpromoter；riceglutelinpromoter；iPAs；Cytokinin；seedandseedweightJ二耍大学硕士论文水稻种子蛋白启动子驱动下的护l基因在转基因烟草中的

8、特异表达第一章文献综述一、前言近几十年来，随着人口的