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时间:2019-05-13
《番茄解偶联蛋白LeUCPcDNA的克隆及功能的初步分析》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、一-~朴一呻~一一一一一篇鱿江摘要1976年在褐色脂肪细胞中首次发现解偶联蛋白LfcP(UncouplingProtein).UCP是位子线粒体内膜的载体蛋白,其通过介导质子渗漏而降低跨线粒体内膜的质子电势,使这部分能量转化为热能。因此其荃本功能是产热,此外在哺乳动物中还有调节ATP的合成,调控脂肪酸载化等功能,控制自由基的产生,推测其与肥胖,糖尿病有一定关联,并可能参与细胞凋亡。1997年,从马铃薯中克隆出一个与动物中UCP类似的签因,命名为StUCF.在植物中,已经克隆出UCPcDNA的植物有马铃薯、拟南芥,大麦,水稻等。对
2、于UCP在植物中的功能、表达调控研究还很少。目前尚未有克隆出番茄UCP(LeUCP)cDNA的报导,本实验采用5"CDNA末端快速扩增技术(5'RACE?和30RACE,克隆出其cDNA的5'和3'端序列,并进一步克隆出其全长的cDNA序列,序列E被CenBank接受(AF472619)ALeUCPcDNA可能的ORF为921bp,编码一段306氨基酸的多肤。LeUCP具有很强的保守性,氨基酸序列与Stucp的同源性力99%e为了进一步阐述LeUCP在番茄生长发育中的劝能,本研究选用本实验室培育的航天诱变番茄为研究材料,其具有早
3、熟和产量增加等优良性状。由于UCP在哺乳动物中有调节能璧代谢的功能,所以研究航天诱变番茄中LeUCP的变化情况将有助于阐明空间环境引起早熟和产量增加与LeUCP的关系。而通过对果实不fIl发育时鹅的LeUCP表达情况和低温状态下LeUCP表达情况的研究,也将对阐明LeUCP在番茄中的生物功能具有重大意义。将突变番茄的LeUCPcDNA与地面对照进行比较,未发现有突变位点二而在诱变番茄和地面对照中的根、茎和叶中,LeUCP的表达情况无明显差异,这说明空间环境引起的番茄熟期提前和产量增加等性状,并不是:-hLeUCP的变化而引起的。
4、NORTHERN杂交表明LeUCP表达于番茄的根、茎、叶、花和果实中,在花中最多,在茎和叶中较少。番茄不同阶段(青、黄、橙)的果实中,LeUCP的表达量随果实的成熟增加。这表明LeUCP可能参与了果实的成熟过程e而将番茄放置在4'C天,LeUCP表达显著升高。因此LeUCP在番茄抵抗低温中起一定的作用。因此,本研究将为LeUCP功能的阐明提供里要信息。关键词Let=CP,番茄;RACE;寒冷诱导:果实成熟哈尔滨工业大学工学硕卜学位论文AbstractUncouplingprotein(UCP),amitochondrialinn
5、ermembraneprotein,canmediatemitochondrialprotonleak,decreaseATPsynthesisandreleaseprotonelectrochemicalgradientasheat.Inmammals,UCPcancontrolreactiveoxygenspecies(ROS)production,negativelyregulateinsulinsecretion,andplayanimportantroleinobesityanddiabetes.Insomeplant
6、s,likepotato,itisreportedthatUCPpossiblycontributestoflowering,fruitripeningandresistancetocold.ButUCPgeneoftomato(LeUCP)hasnotbeenclonedanditsfunctionisnotwellunderstood.Wehavegothighyieldmutantsoftomatoinanalysisofphysiologicalandbiochemicalchangesofplantseeds,whic
7、hhavebeenexposedtospaceenvironmentinrecoverablesatellite.InordertoinvestigateLeUCP'sconnectionwiththehighyieldoftomatomutants,weclonedtheUCPcDNAofnormaltomato(control).Byusing5'RACEand3'RACEmethod,a3536ptomatoESTwithhighhomologytoStUCPwasusedtoobtainthe4486p5'endsequ
8、enceand628bp3'endsequence.Thenthe1429bpcompletecDNAsequenceofLeUCPwasobtainedbyRT-PCRThecDNAcontainsanopenreadingframeof921byandenc
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