蜡梅小gtp结合蛋白基因cprac1的克隆及功能初步验证

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1、单位代码１０６３５学号１１２０１２３２５００１７９４硕士学位论文蜡梅小ＧＴＰ结合蛋白基因ＣｐＲＡＣｌ的克隆及功能初步验证论文作者：门维停指导教师：眭顺照教授李名扬教授学科专业：风景园林学研究方向：园林植物资源与培育提交论文日期：２０１５年５月２０日论文答辩日期１５年５月２８曰：２０学位授予单位：西南大学Ｖ■＞Ｔ‘中国？重庆？２０１５年０５月、独创性声明学位论文题目：錯梅小ＧＴＰ结合蛋白基因似ａ的克降及功能初步验证本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得

2、的研究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已加了特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同仁在文中作了明确说明并表示衷心感谢。＂二Ｃ学位论文作者：签字日期：么年月日ｔ／ｉ］约Ｊ学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院（筹）可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解

3、密后适用本授权书，本论文：Ｅｆ不保密，口保密期限至年月止）。Ｚ学位论文作者签名：导师签名：丨签字日期：石Ｏｉ年月２日签字曰期：／ｒ年＾月么日ｌ＃Ｊ６目录股ｉ■胃ＩＡｂｓｔｒａｃｔＩｌｌ一１第章文献综述１．１１錯梅研究进展１．１．１形态与分布１１．１．２种属关系与品种分类１１．１．３蜡梅的幵发和应用２１．１．４分子生物学在蜡梅研究中的应用３１．２ＧＴＰ３小结合蛋白概述．１ＧＴＰ结合蛋白１．２３１．２．２小ＧＴＰ结合蛋白４．Ｐ１．２３小ＧＴ结合蛋白的结构和作用机制４

4、１．２．４小ＧＴＰ蛋白的分类和生物学功能５１．３Ｒａｃ／Ｒｏｐ蛋白概述６１．３．１Ｒａｃ／Ｒｏｐ蛋白的发现６１３２ＲａｃＲ７．．／ｏｐ蛋白的结构特点和分类．Ｒａ理１３．３ｃ／Ｒｏｐ蛋白的作用机８１．３．４Ｒａｃ／Ｒｏ蛋白的生物学功能９ｐ第二章引言１５２．１研究背景１５２．２研究Ｈ的、内容及意义１５．１５２３研究技术路线第三章蜡梅小ＧＴＰ结合蛋白基因ＣｐＭＣＩ的克隆和分子特征分析１７３．１实验材料１７３１．１ＤＮＡ１７．錯梅ｃ文库及植物材料３．１．２菌株与载体１７３１．３７

5、．主要试剂及试剂盒１．．３１４主要仪器设备１７３．１．５自配的主要试剂１８３２１８．实验方法．ＳＴ３．２１Ｅ序列特征分析及目标克隆子的鉴定１８ｉ西南大学硕士学位论文３．２．２蜡梅ＣｐＲＡＣｌ基因ｃＤＮＡ序列的获得１９３．２．３蜡梅ＣｐＲＡＣｌ基因的生物信息学分析２２３．３结果与分析２２３．３．１蜡ｃＤＮＡ的获得及其序列特征梅ＣｐＲＡＣｌ基因２２３．３．２蜡梅ＣｐＲＡＣｌ基因编码蛋白的基本特征预测分析２４３．３．３蜡梅ＣｐＲＡＣｌ基因编码蛋白的同源性分析２５３．３．４蜡梅ＣｐＲＡａ基因编码蛋白的

6、聚类分析２６３．３．５婚梅ＣｐＲＡＣｌ蛋白与拟南芥ＲＡＣ蛋白的聚类分析与多重序列比对．．．．．２８３，４讨论２９第四章蜡梅基因的表达特性分析３１４１．实验材料３１４．２实验方法３１４．２．１錯梅不同组织、不同时期及不同胁迫处理材料的采集３１４２２总ＲＮＡ的提ＤＮＡ第一３２．．取及ｃ链的获得４．２．３ＣｐＲＡＣｌ基因表达特性的实时焚光定量分析３２４．３结果与分析３４４．３．１蜡梅总ＲＮＡ提取３４４．３．２ＣｐＲＡＣｌ基因的表达特性分析３４４．４讨论４０第五章蜡梅Ｃｐ见４Ｃ７基因表达

7、载体的构建及拟南芥遗传转化研究４１５．１实验材料４１５．１．１植物材料４１５．１．２载体及菌株４１５．１．３试剂盒及主要试剂４１５．１．４自配的主要试剂４１５．２实验方法４２５．２．１蜡梅ＣｐＲＡａ基因植物超表达载体的构建４２５．２．２农杆菌ＥＨＡ１０５冻融法感受态的制备４４５．２．３冻融法转化农杆菌ＥＨＡ１０５感受态细胞４４５．２．４农杆菌转化子的ＰＣＲ鉴定及反转化大肠杆菌鉴定４４５．５．２花序侵染法转化拟南芥４５５．２．６转基因拟南芥的蹄选鉴定４６５７．２．转基因拟南芥的表型观察