暗黑鳃金龟气味结合蛋白的基因克隆及功能研究

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1、分类号幽§；她鲢学号2Q鲤尘Q2丝堇南京爱黄戈学博士学位论文暗黑鳃金龟气味结合蛋白的基因克隆及功能研究鞠倩指导教师韩召军教授专业名称农业昆虫与害虫防治研究方向昆虫生化与分子生物学答辩El期二O一三年五月MoLECULARANDFUNCTIoNALCHARACTERIZATIONoFoDoRANTBINDINGPRoTEINSIN勇眦DZR^a刚刚冠4乙乙点!幽byIlillllilllll(iifliilil{llqilil{Hl{(1l

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3、ubmittedtoNanjingAgriculturalUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDoctoralDegreeofAgricultureScienceSupervisedbyProfessorHanZhaojunDepartmentofEntomologyCollegeofPlantProtectionNanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095，P．R．ChinaJune2013原创

4、性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者(需亲笔)签名：媳意wB年6月／El学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可

5、以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密口，在——年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。(请在以上方框内打“4”)学位论文作者(需亲笔)签名：谰债导师(需亲笔)签名：刀f多年占月／日伽t3年f月否日目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．IABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．V英文缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。Ⅸ第1章文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11．1昆虫嗅觉感知概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11．2气味结合蛋白的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21．2．1气味结合蛋白的结构特征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21．2．2气味结合蛋白的分类及进化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．2．3气味结合蛋白与信息素及其它配基的结合研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．2．4气味结合蛋白的3D结构的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯101．2．5气味结合蛋白的功能研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯121．3化学感受蛋白的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131．4金龟子气味结合蛋白及化学感受蛋白的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯161．5金龟子性诱剂和食诱剂的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯161．5．1金龟子性诱剂的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．171．5．2金龟子食诱剂的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．171．6本研究的目的与意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18第2章暗黑鳃金龟气味结合蛋白基因的克隆、序列分析和表达谱研究⋯⋯⋯⋯⋯212．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯222．1．1试虫及试虫收集⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．222．1．2主要试剂和仪器设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。222．1．3昆虫总RNA的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯232．1．4eDNA第一链的合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。242．1．5暗黑鳃金龟OBP基因

9、同源搜索及引物设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯242．1．6PCR反应体系及反应程序⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．262．1．7RACE技术扩增OBP基因的eDNA全序列⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯262．1．8PCR产物纯化、克隆和测序及序列分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．262．1．9暗黑鳃金龟OBP组织表达谱分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯272．2结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯