暗黑鳃金龟幼虫对bt蛋白的反应及类钙粘蛋白的克隆与表达分析

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1、分类号：S476.ll学校代码：10712UDC.632研究生学号：2012050145密级：公开A灶衣林费祆大学2015届攻读硕士学位研究生学位（毕业）论文暗黑鳃金龟幼虫对Bt蛋白的反应及类钙粘蛋白的克隆与表达分析学科专业农业昆虫与害虫防治研究方向昆虫生态与害虫综合治理研究生张美翠___________指导教师仵均样教授李克斌研究员完成时间2015年5月中国陕西杨凌研究生学位（毕业）论文的独创性声明本人声明：所呈交的硕士学位（毕业）论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究结果；论文中的研究数

2、据及结果的获得完全符合学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》，如果违反此规定，一切后果与法律责任均由本人承担。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究结果，也不包含其他人和自己本人已获得西北农林科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文的致谢中作了明确的说明并表示了谢意。导师指导研究生学位（毕业）论文的承诺本人承诺：我的硕士研究生.所呈交的硕士学位（毕业）论文是在我指导下独立开展研究工作

3、及取得的研究结果，属于我现岗职务工作的结果，并严格按照学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》而获得的研究结果。如果违反学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》，我必须接受按学校有关规定的处罚处理并承担相应导师连带责任。关于研究生学位（毕业）论文使用授权的说明本学位（毕业）论文的知识产权归属西北农林科技大学。本人同意西北农林科技大学保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；同意西北农林科技大学将本学位（毕业）论文的全部或部分内容授权汇编录入《中

4、国优秀硕士学位论文全文数据库》进行出版，并享受相关权益。本人保证，在毕业离开（或者工作调离）西北农林科技大学后，发表或者使用本学位（毕业）论文及其相关的工作成果时，必须以西北农林科技大学为第一署名单位，否则，按违背《中华人民共和国著作权法》等有关规定处理并追究法律责任。任何收存和保管本论文各种版本的其他单位和个人（包括研究生本人）未经本论文作者的导师同意，不得有对本论文进行复制、修改、发行、出租、？文编等侵犯著作权的行为，否则，按违背《中华人民共和国著作权法》等有关规定处理并追究法律责任。(保密的学位论文在

5、保密期限内，不得以任何方式发表、借阅、复印、缩印或扫描复制手段保存、汇编论文）Classificationcode:S476.11Universitycode:10712UDC:632Postgraduatenumber:2012010545Confidentialitylevel:OpenThesisforMaster’sDegreeNorthwestA&FUniversityin2015THEEFFECTOFBTPROTEINONTHELARVAEANDCLONEANDANALYZETHEEXPRESS

6、IONOFCADHERIN-LIKEPROTEININHolotrichiaparallelaMajor:AgricultruralInsectandPestManagementResearchfield:EntomologicEcologyandIPMNameofPostgraduate:ZhangMeicuiAdviser:Prof.WuJunxiangProf.LiKebinDateofsubmission:May2015YanglingShaanxiChina暗黑鳃金龟幼虫对Bt蛋白的反应及类钙粘蛋

7、白的克隆与表达分析摘要暗黑鳃金龟HolotrichiaparallelaMotschulsky是公认的难以防治的农林重要害虫，其幼虫严重为害花生、大豆、马铃薯、小麦等农作物。苏云金芽孢杆菌Bacillusthuringiensis（简称Bt）是目前世界上应用范围最广的微生物杀虫剂。研究表明，Bt产生的伴孢晶体含有杀虫晶体蛋白，能有效地防治鳞翅目、鞘翅目、双翅目等200多种害虫及动植物线虫。类钙粘蛋白是一类依赖钙离子的跨膜糖蛋白，在细胞识别、细胞信号转导及维持细胞形态结构等方面发挥着重要的作用，而且是Bt最重

8、要的受体蛋白。目前，关于这些方面的研究主要集中在鳞翅目昆虫，对于鞘翅目昆虫的研究很少，尤其是地下害虫更是少之又少。本研究以暗黑鳃金龟幼虫为供试对象，通过转录组测序、RACE以及实时荧光定量PCR等技术，在研究暗黑鳃金龟幼虫对Bt蛋白毒力反应的基础上，进一步对其类钙粘蛋白基因进行了克隆和表达量分析，主要研究结果如下：1、建立琼脂糖凝胶颗粒生测体系，在25℃下，用不同浓度的3种Bt蛋白饲喂暗黑鳃金龟5日龄幼虫，14天