海洋酵母普鲁兰类酵母一种新型生淀粉酶生产和特性研究

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1、中国海洋大学博士学位论文海洋酵母普鲁兰类酵母一种新型生淀粉酶生产和特性研究姓名：李海峰申请学位级别：博士专业：海洋生物学指导教师：池振明20070528原料生产高浓度的粗酶液。通过对固体发酵参数的优化，成功地将发酵提取液中的粗酶比活力提高到了120．5U／mg蛋白。相对于液体发酵粗酶液，酶比活力提高了一倍。本实验研究获得了一株高产新型生淀粉酶的海洋酵母菌株N13d，这是首次关于海洋普鲁兰类酵母产生淀粉酶的报道，开发了新的淀粉酶资源。经过液体发酵，我们得到了生淀粉酶的粗酶液，粗酶液能够降解高浓度的生土豆淀粉，水解产物基本全是葡萄糖。纯酶性质的实验结果

2、表明海洋酵母普鲁兰类酵母N13d产的生淀粉酶与其他酵母和真菌所产的生淀粉酶有很多不同之处，最有特色的有两点，一是该酶具有很强的降解a．1，6糖苷键的能力；二是该酶对高浓度的生土豆淀粉同样具有极强的降解能力。N13d产生的生淀粉酶可以在食品和发酵工业用来水解生土豆淀粉，产物可以直接作为发酵原料，应用前景广阔。本研究表明海洋酵母具有独特的生理特征，能够产生一些与陆地酵母和真菌所产的酶不同的新型酶类，为工业生产提供资源。关键词：海洋酵母，淀粉酶，蛋白纯化，生淀粉，固体发酵Thestudyoncharacteristicandproductionofano

3、velrawstarchamylasefrommarineyeastAureobasidiumpullulansAbstractMarineyeastsareakindofmieobialcommunitylivinginmarineenvironmentswhichplaysaimportantroleinmarineeeo-system．]M_arineyeaststrainsCallproducemanyenzymessuchasprotease，amylase,lipase，phytase，inulinase，cellulase，kille

4、rtoxinandsoon．Itisaninterestingworkforl坞toinvestigatetheapplicationofthesebioresourees．Inthisstudy,marineyeaststrainN13d,producingahighamountofextracellularamylasewasisolatedfromthedeepseasedimentsofPacificOcean．ThisstrainWasidentifiedtobeAureobasidiumpullulansby18SrRNAgeneseq

5、uenceanalysisandroutineyeastidentificationmethods．ThisisthefirstreportthatmarineAureobasidiumpullulansproducedextracellularamylase．BasedOnoptin枷mediumandflaskcultivationconditionsforamylaseproductionbythemarineyeastN13dwecarriedoutamylaseliquidfermentationexperimentby2Lferment

6、or．Undertheoptimalaerationrate6Lmin一1andagitationspeed250rpmtheamylasespecificactivityina眦enzymepreparationreach58．5U／mgprotein．HydrolysisofrawpotatostarchWascarriedoutat60℃．After6hofincubation,59．5％oftherawpotatostarchwith36％concentrationWashydrolyzed．Theendproductwasidentifi

7、edtoglucosebyTLCandHPLc．Inordertoexplorethepotentialapplicationofthisamylasewepurifiedthiseozymeandcarriedoutacomprehensivestudyaboutthepropertiesofenzyme．Theresultsshowedthatthisamylasepossessingamolecularweightof98kDaisakindofghicoamyhse．Andthisenzymecomprisedtwosubunitswhos

8、emolecularweightare33kDaand65kDarespectivelyWithagoodthermals