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《产淀粉酶海洋酵母菌的筛选及鉴定(1)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第37卷增刊中国海洋大学学报37(Sup.):095~1002007年12月PERIODICALOFOCEANUNIVERSITYOFCHINADec.,2007产淀粉酶海洋酵母菌的筛选及鉴定王晓红,池振明(中国海洋大学海洋生命学院海洋微生物学实验室,山东青岛266003)摘要:从采集自南海、南极、烟台长岛、青岛近海的沉积物样品及鱼类肠道内容物样品中分离得到海洋酵母菌并筛选目的菌株,对菌株所产粗酶的最适pH和温度、目的菌株的生理和生化特征及18SrDNA部分序列进行分析。得到8株能够产淀粉酶的海洋酵母菌,并确定菌株Ba,H,M和W1a是解脂耶罗威亚酵母(Yarrowial
2、ipolytica),DMC是平滑假丝酵母(Candidaparapsilosis),W13a,G7b和N13d是普鲁兰短梗霉(Aureobasidiumpullulans)。发现解脂耶罗威亚酵母、平滑假丝酵母和普鲁兰短梗霉是可以产生淀粉酶的新的酵母菌菌种。关键词:海洋酵母菌;淀粉酶;18SrDNA;进化树中图法分类号:Q93331;Q936文献标识码:A文章编号:16725174(2007)0609506淀粉酶(EC3211)是1种用途极广的生物催化剂,酵母菌的分布进行了初步研究。可应用于面包制作业、淀粉的糖化和液化、纺织品脱1材料与方法浆、造纸业
3、、清洁剂工业、化学和临床医学分析和制药业等。淀粉酶家族包括淀粉酶、淀粉酶和葡萄糖淀1.1材料粉酶等。淀粉酶为内切酶,以无规则的方式切开淀粉1.1.1菌株来源从采集自南海、南极、烟台长岛和分子内部的1,4糖苷键而使淀粉生成糊精和低聚糖青岛近海的沉积物样品及鱼类肠道内容物样品中筛选2+等,是1种Ca依赖性酶;淀粉酶从非还原性末端顺得到产淀粉酶的海洋酵母菌8株。次切下麦芽糖,为外切酶;葡萄糖淀粉酶是作用于1,1.1.2培养基摇瓶发酵培养基:可溶性淀粉20.04糖苷键的外切酶,从非还原性末端切下葡萄糖分子。g,蛋白胨20.0g,酵母粉10.0g,琼脂20.0g,陈海水淀
4、粉由于价格低廉、来源广泛,成为酵母菌生产单1000mL,pH自然,121!灭菌20min。细胞蛋白和乙醇的最好底物。环境中的酵母菌菌株大[12]曲利酚蓝平板培养基:可溶性淀粉20.0g,蛋白胨部分是安全的,所以可降解淀粉的酵母菌受到了日20.0g,酵母粉10.0g,曲利酚蓝溶液(1.0%)10mL,益广泛的关注。许多陆地酵母菌及所产的胞外淀粉酶[24]琼脂20.0g,陈海水1000mL,121!灭菌20min。已被广泛研究。许多由真菌产生的淀粉酶具有降YPD培养基:葡萄糖20.0g,蛋白胨20.0g,酵母解生淀粉的能力,例如,酵母菌Cryptococcussp.S2产粉10.0g,琼脂2
5、0.0g,陈海水1000mL,pH自然,生的淀粉酶AMYCS2可降解小麦淀粉、玉米淀粉等多种淀粉[5]。在菌株CorticiumrolfsiiAHU9627所115!灭菌30min。富集培养基:氯霉素0.5g,葡萄糖20.0g,蛋白胨产生的5种形式的葡萄糖淀粉酶中,G1,G2和G3可较大程度降解谷类淀粉[6]。20.0g,酵母粉10.0g,琼脂20.0g,陈海水1000mL,115!灭菌30min。淀粉酶因为具有消化含淀粉食物的能力,在海洋动物肠道中有重要作用淀粉酶的活性决定哪种食1.2方法物成分可被分解、吸收利用[7]。酵母菌可以用做饲料1.2.1菌株的分离筛选将沉积物样品及鱼肠道内酵
6、母添加到饲料中。因此,产淀粉酶的海洋酵母菌在容物样品分别置于含50mL富集培养基的250mL三海水养殖和饲料工业中有广泛的应用。但目前关于产角瓶中28!培养48h,摇床转速170r/min。用无菌淀粉酶海洋酵母菌的研究仍非常有限。生理盐水对富集产物进行10倍系列稀释,涂布含氯霉本论文在对筛选到的8株产淀粉酶海洋酵母菌形素的YPD平板,28!培养48h。挑取酵母菌单菌落进态特征观察、生理生化特性鉴定及18SrDNA序列分析行平板划线纯化,将纯化的菌株置于15%的甘油溶液的基础上,对菌株所产淀粉酶的性质及产淀粉酶海洋中,-80!保存备用。基金项目:科技部科技基础平台建设项目(2005DK2120
7、9)资助收稿日期:20070326;修订日期:20070710作者简介:王晓红(1981),女,硕士生。Email:wxhcurl@yahoo.com.cn通讯作者:Email:zhenming@sdu.edu.cn96中国海洋大学学报2007年在筛选培养基平板上点种实验室保藏菌株,28!0.1mol/L甘氨酸NaOH缓冲溶液(pH9.0~10.0)。培养48h,
