人剪切修复基因xpd抑制肝癌hepg2细胞增殖迁移及对自噬水平调控的实验研究

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1、分类号：密级：UDC：学号：416522612021南昌大学专业学位研究生学位论文人剪切修复基因XPD抑制肝癌HepG2细胞增殖迁移及对自噬水平调控的实验研究ResearchofXPDgenesuppressproliferationandmigrationinhumanhepatocellurcarcinomaHepG2cellaswellasdysregulateautophagyinvitro李琳琳培养单位（院、系）：南昌大学第二附属医院指导教师姓名、职称：张吉翔教授主任医师申请学位的学科门类：医学学科专业名称：内科

2、学（消化）论文答辩日期：2015年5月答辩委员会主席：何明评阅人：陈建勇刘丹2015年5月I一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：李琳琳签字日期：2015年6月9日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了

3、解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：李琳琳导师签名（手写）：

4、张吉翔签字日期：2015年6月9日签字日期：2015年6月9日论文题目人剪切修复基因XPD抑制肝癌HepG2细胞增殖迁移及对自噬水平调控的实验研究姓名李琳琳学号416522612021论文级别博士□硕士院/系/所医学部专业内科学（消化）E_mail备注：无公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要目的：探究上调肝癌细胞株HepG2中XPD基因的表达后对肿瘤细胞增殖凋亡、迁移以及自噬水平变化的影响。方法：采用脂质体作为载体介质将重组质粒pEGFP-N2/XPD和空载质粒pEGFP-N2瞬时转染入人

5、肝癌细胞株HepG2细胞内，实验分为四组1）空白对照组、2）脂质体组、3）pEGFP-N2组、4）pEGFP-N2/XPD组，使用荧光显微镜观察绿色荧光表达情况；MTT法观察肿瘤细胞的增殖能力；流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡情况；体外平板克隆形成实验观察肿瘤细胞体外克隆集落形成情况；划痕愈合实验及Transwell实验检测肿瘤细胞迁移能力的变化。Westernblotting检测HepG2细胞XPD及自噬相关蛋白LC3、P62表达量的变化。结果：荧光显微镜观察转染空载质粒pEGFP－N2和重组质粒pEGFP－N2/XPD的细胞

6、可见绿色荧光，转染有效。上调XPD的表达后，结果显示与对照组比较，实验组细胞增殖能力减弱(p<0.01)，细胞凋亡率增加(p<0.01)，体外克隆形成数量减少(p<0.01)，迁移能力减弱(p<0.05)，并且上调LC3蛋白表达(p<0.01)，而随之P62的表达水平减少(p<0.01)。结论：过表达XPD基因能显著抑制肝癌细胞增殖促进其凋亡，抑制体外克隆形成，并且降低肿瘤细胞的迁移能力，同时调控肝癌细胞自噬水平的活化。关键词：肝癌，XPD，增殖，凋亡，迁移，自噬IIAbstractABSTRACTObjective:To

7、investigatetheeffectofXPDonthebiologicalfunctionofhepatocellularcarcinomacellHepG2,includingcellproliferation,apoptosis,migrationaswellasautophagy.Methods:TherecombinantplasmidpEGFP-N2/XPDandemptyvectorpEGFP-N2weretransfectedintohumanhepatomacelllineHepG2throughli

8、posometransiently.Experimentwasdividedintofourgroup{1)controlgroup,2)liposomegroup,3)pEGFP-N2group,4)pEGFP-N2/XPDgroup}.Theexpressionofgreenfluorescentp