抗c-myc纳米抗体的淘选、表达及应用

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1、分类号:密级：UDC：学号：405604612032南昌大学硕士研究生学位论文抗c-Myc纳米抗体的淘选、表达及应用Thebiopanning,expressionandapplicationofanti-c-Mycnanobodies许菲培养单位（院、系）：生命科学学院指导教师姓名、职称：付金衡副教授申请学位的学科门类：理学学科专业名称：微生物学论文答辩日期：2015.5.29答辩委员会主席:评阅人:年月曰一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的

2、地方外，论文中不包:-'T其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证节而使用过的材料^与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）:签字F!期：年月；；二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留'使用学位论文的规定，丨,fj:泛学校有权保留并向国家有关部n或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被杳阅和借阅s本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入右尤数据库进彳r检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、■/「

3、:编本学位沦文•■同时授权北京万方数据股汾有限公司和中国学术期谓c光盘钣）电干：,,j社将本学位论文收泶到《中闺学位论文全文数据库》和《屮国优秀博硕士学论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提洪信息服务，内蒽按“章程”规定亨受相关权益„'学位论文作者签名（手写）:导师签名（手写）签字円期：年月签字FI斯：论文题Hj^____色浪^号丨和从I论文级别丨博士[士口硬:■**~F—————1----I1■一—,;.____J院/系/所专业输公丌□保密（向校学位办1■-请获批准为“保密”，摘要摘要细胞中，存在着一类基因或者是基因家族，其在

4、通常情况下为抑制状态或维持较低表达水平，当其在某些因素作用下，基因表达失去控制，细胞的正常生物学性状会发生各种改变,逐步转化成为恶性细胞,最终导致细胞甚至机体癌变。这类基因我们通常称之为原癌基因(Proto-oncogene)。myc基因家族为原癌基因家族中的一类，主要分为c-myc、n-myc、l-myc三类基因。myc基因家族及其产物主要与调控细胞周期的DNA结合,控制细胞的增殖以及诱导细胞的凋亡。研究认为，肿瘤的发生与转移同c-myc基因的激活有密切关系。量子点（QDs）是由II-VI族或III-V族元素组成的半导体材料，属于纳米晶体

5、，受激后能发射荧光，可用于生物学分析。量子点激发光谱宽，同时发射光谱窄并且左右对称，可以通过改变粒子大小控制荧光发射波长。与传统有机荧光染料相比，量子点具有很高的量子产率和抗光漂白能力，而且荧光寿命长，具有良好的生物相容性。因此，量子点荧光技术在生物学领域具有广阔前景。本研究采用噬菌体展示技术，从羊驼免疫库中淘选能与c-Myc结合的纳米抗体，并将淘选获得的抗c-Myc纳米抗体在大肠杆菌中进行表达，纯化的重组抗c-Myc纳米抗体经量子点标记后，初步用于检测细胞内c-Myc蛋白的表达情况，主要研究结果如下：1、通过四轮固相淘选，从羊驼c-Myc

6、蛋白免疫文库中获得了了11个能特异性结合c-Myc蛋白的克隆，分别为A13、A18、A25、A26、A31、A32、B34、C5、C24、C42、C46，并对这些克隆的亲和力大小进行了分析比较。2、选取亲和力相对较高的克隆（A25和A26），分别将编码基因克隆至表达载体pET-25b（+），在大肠杆菌表达系统中，使用IPTG诱导表达，SDS-PAGE电泳结果显示，重组蛋白分子量约20kDa，与预期分子大小相符。3、初步验证了利用量子点标记重组纳米抗体用于细胞内靶标检测的方法。制备SP2/0细胞爬片，用量子点荧光标记纳米抗体，检测c-Myc蛋

7、白在细胞内表达，加入纳米抗体及量子点后，细胞显示荧光，单纯加入量子点，无荧光反应，本研究得到的纳米抗体有望实现对细胞内c-Myc蛋白表达情况检测。关键词：纳米抗体；c-Myc；ELISA；量子点IAbstractAbstractIncells,thereisaclassofgenesorgenefamilies.Undernormalcircumstances,theyareininhibitory,lowexpressionandinsufficient.Whentheycomeintosomefactors,thegeneexpress

8、ionlosscontrolandbiologicalcharacteristicsofnormalcellstakechange,graduallytransformtomal