伴甲状腺发育不全的先天性甲状腺功能减低症患儿致病基因的筛查研究

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1、分类号：R581.2密级：不保密UDC：610学校代码：11065硕士学位论文伴甲状腺发育不全的先天性甲状腺功能减低症患儿致病基因的筛查研究柴建指导教师葛银林教授学科专业名称生物化学与分子生物学论文答辩日期2015.06.03摘要目的：研究伴甲状腺发育不全的先天性甲状腺功能减低症（congenitalhypothyroidism，CH，简称先天性甲低）患儿PAX8和HHEX基因突变类型和特点，并初步探讨PAX8突变导致甲状腺发育不全(thyroiddysgenesis，TD)的遗传方式，为CH患儿的基因诊断和基因治疗提供理论依据。方法：首先对选取的63例T

2、D患儿抽取外周血，进行基因组DNA提取，然后PCR扩增PAX8基因，对PCR产物进行直接测序，利用生物信息学软件对63例PAX8测序结果分析。另外，利用同样的方法对234例TD患儿进行HHEX基因突变筛查。结果：对63例PAX8基因测序结果分析，在1例伴缺如的TD患儿中发现1个错义突变c.155G/C,p.Arg52Pro。为进一步研究PAX8的遗传方式，对其正常父母进行PAX8基因突变筛查未发现突变，表明此患儿所得TD为新生突变（denovomutation）所引起的。分析234例HHEX基因测序结果，在编码区未发现任何突变，但在第2内含子区发现1个SN

3、P位点（rs2275729，IVS2+127G/T,变异频率为5.13%）。然后，利用SPSS17.0统计学软件对TD组和MAF最小等位基因频率进行比较，结果显示两组之间等位基因频率差异无显著性（P>0.05），该SNP位点与TD的发生无相关性。结论：PAX8基因在中国山东地区甲低患者中突变率很低,新生突变能很好的解释TD多为散发性的特点，为TD的发病机制提供了新的理论依据，PAX8基因新生突变与甲状腺发育异常有关。同时证实HHEX基因突变率在中国山东地区甲低患者中很低，可能不是山东地区甲低患者的致病基因。硕士研究生柴建（生物化学与分子生物学）指导老师葛银

4、林教授刘世国副主任医师关键词：先天性甲状腺功能减低症；甲状腺发育不全；PAX8;新生突变;HHEXAbstractObjectiveTostudythefeaturesofPAX8andHHEXmutationsandgeneticcharacteristicsinchildrenwiththyroidagenesis(TD),inordertoprovideevidenceforgenediagnosisandgenetreatmentofCongenitalhypothyroidism(CH).MethodsBloodsampleswerecollec

5、tedfrom63TDpatientsinShandongProvince,China,andgenomicDNAwasextractedfromperipheralbloodleukocytes.Exon3~4ofPAX8wereanalyzedbyPCRanddirectsequencing.Meantime,screenHHEXgeneof234TDchildrenusingthesamemethods.ResultsDirectsequencingofPAX8revealedaheterozygousmissensemutation(c.155G/

6、C,p.Arg52Pro)inonechildwithagenesis.Geneticscreeningofthechild’sfamilyrevealedthattheclinicallyunaffectedparentsdonotcarrythemutation,suggestingthattheidentifiedsequencechangeisadenovomutation.SequenceanalysisofHHEXdidnotshowanynon-synonymousvarianceinthecodingregions,however,wefo

7、undaSNP(IVS2+127G/T,5.13%)intheintron2.StatisticalanalysisofthedatawasperformedwithSPSS17.0softwarepackage.Moreover,thedifferenceintheallelicfrequencybetweenpatientsandMAFminorallelecountwasnotsignificant(p＞0.05).ConclusionsDenovomutationscanwellexplainTDforthecharacteristicsofspo

8、radic,providinganewtheorybasisfor