先天性甲状腺功能减退症伴甲状腺肿大患儿duoxa2基因突变筛查及致病机理研究

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1、分类号：R581.2密级：不保密UDC：612.4学校代码：11065硕士学位论文先天性甲状腺功能减退症伴甲状腺肿大患儿DUOXA2基因突变筛查及致病机理研究刘璐指导教师阎胜利教授学科专业名称内分泌与代谢病论文答辩日期2015年5月31号摘要目的研究中国山东地区先天性甲状腺功能减退症(CH)伴甲状腺肿大患儿双氧化酶成熟因子2(DUOXA2)基因突变的类型及特点，并对新发现的DUOXA2突变进行功能学研究，以阐明DUOXA2基因突变导致CH伴甲状腺肿大的致病机理。方法选取山东地区75例CH伴甲状腺肿大的患儿作为研究对象。提取其外周静脉血基因组DNA，采用PCR扩

2、增与直接测序的方法，对DUOXA2基因全部外显子进行突变筛查。并对本实验发现的DUOXA2新突变（c.C78G，p.I26M）进行功能学研究，以DUOXA2野生型或突变型与DUOX2野生型真核表达载体共转染Hela细胞，用Westernblot技术检测DUOXA2与DUOX2蛋白的表达，与野生型比较分析突变型DUOXA2导致蛋白表达的改变。应用多功能酶标仪检测H2O2的产生，与野生型比较分析突变体DUOXA2导致DUOX2酶活性的改变。结果在75例CH伴甲状腺肿大患者中，发现1个新的杂合子错义突变（c.C78G，p.I26M），携带该突变的患者表现为轻度的暂时

3、性甲减。同时发现了1个已知的纯合子无义突变（c.C738G，p.Y246X)，该患者表现型为轻度的永久性甲减。功能学研究证实新发现的突变型DUOXA2（p.I26M）没有引起DUOX2及DUOXA2蛋白量的改变，但导致DUOX2酶活性降低，影响H2O2的生成。结论在对75例CH伴甲状腺肿大患儿进行DUOXA2突变筛查中，发现了1例新的DUOXA2突变和1例已知的突变。功能研究证实DUOXA2是甲状腺激素合成过程中重要的成分，DUOXA2突变可导致甲状腺激素合成障碍，从而导致CH伴甲状腺肿大的发生。硕士研究生刘璐（内分泌与代谢病专业）指导教师阎胜利教授关键词：先

4、天性甲状腺功能减退症；DUOXA2；突变AbstractObjective:TheaimofthisresearchwastoidentifythetypesandcharactersticsofDUOXA2mutationsassociatedwiththegenotype–phenotyperelationshipincongenitalhypothyroidism(CH)withgoiterpatientsfromShandongProvince,China.WeexploredtheeffectsofthenovelDUOXA2mutation(p.I

5、26M)onDUOXA2function,inordertostudythepathogenesisofCHwithgoitercausedbyDUOXA2mutation．Methods:Weenrolled75patientsofCHwithgoiterinShandongProvince,China,andextractedGenomicDNA.AllexonsofDUOXA2genewereamplifiedbyPCRandtheproductsweredirectlysequencedtofindnewmutationstypesofDUOXA2ge

6、ne,Bloodsampleswerecollectedfrom67patientswithCHandgoiter.Furthermore,inordertoexploretheeffectsofthenovelDUOXA2mutation(p.I26M)onDUOXA2function,weconstructedtheexpressionvectorofwild-typeandmutative-typeofDUOXA2gene,aswellasthewild-typeofDUOX2gene.DUOXA2andDUOX2proteinexpressionlev

7、elsweredetectedbywesternblotting,andNADPHoxidaseactivitydeterminedbymeasuringH2O2generationinHeLacells.Results:SequencingofallsixDUOXA2exonsin75caseswithCHandgoiteridentifiedanovelheterozygousmissensemutation,c.C78G(p.I26M),andahomozygoμsnonsensemutation,c.C738G(p.Y246X),inCHpatient

8、swithmildtransienta