孕妇b族链球菌感染荧光pcr检测技术的建立和应用

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1、M例少、考SOOCHOWUNIVERSITY论文题目孕妇B族链球菌感染荧光PCR检测技术的建立和应用研究生姓名—_________________陈泳指导教师姓名______________________陈友国专业名称_________________妇产科研究方向__________产科论文提交日期2015年5月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研宄成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研

2、宂作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名:日期：A苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研宄所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学

3、位论文属在______年_月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：日期；一S、4孕妇B族链球菌感染荧光PCR检测技术的建立和应用中文摘要【背景】B族链球菌（GroupBStreptococcus，GBS）为革兰氏阳性球菌，是围产期和新生儿感染疾病的首要致病菌。GBS按其型的特异性可分为至少10个血清型，任何血清型都能引起早发型GBS感染。已有研究发现，GBS还可引起尿路感染、羊膜炎、产后子宫内膜炎、伤口感染、产时和/或产后菌血症以及死产，生殖道GBS菌落可引起胎膜早破或早产，GBS也已成为新生儿出生后2个月内菌血症和脑膜炎的最常见致病菌。目前的GBS检测方法有：病

4、原分离、革兰氏染色、免疫荧光抗体检测、血清淀粉培养基比色法，检测抗原的多种方法如同协同凝集试验、乳胶凝集试验和酶联免疫吸附试验、以及DNA探针，但血清学方法多存在耗时、耗力、准确率低等缺点，而新发展的快速检测分子生物学的常规方法在某些方面可以弥补血清学的不足，但是环境污染、重复性不高、灵敏度不足、假阳性等限制了推广应用。【目的】建立合理检测方法，快速检测孕妇感染的B族链球菌。【研究方法】本研究采用了实时荧光PCR扩增特异性DNA靶片断，使用荧光标记的杂交探针进行检测并实时监测扩增产物。通过对GBS引物探针的验证、最低检出险、线性范围、准确性、特异性、干扰物质、重复性等进

5、行评价，采用荧光PCR法与序列分析法同时对样本进行检测，综合各种检测方法检测结果，对荧光PCR法试剂进行灵敏度、特异性、总符合率、Kappa值一致性评价及Kappa值的假设检验（U），评价临床考核试验的真实性及可靠性。【结果】4结果显示：本反应体系的灵敏度确定为1×10CFU/ml，线性范围为831×10copies/ml—2×10copies/ml，准确率为100%,特异性良好、不存在干扰，精密度V参考品变异系数CV均小于5%，重复性符合要求。用建立的方法检测苏州大学附属第一医院200份样本，37份阳性全部检出，163阴性全部为阴性。【结论】通过性能评价试验和临床样本

6、验证，本研究建立的实时定量荧光PCR方法是一种特异性强、灵敏度高，重复性好，快速安全的检测方法，可以用于GBS的快速检测。关键词：B族链球菌;荧光定量PCR;快速检测作者：陈泳指导教师：陈友国VIEstablishmentandApplicationofFluorescencePCRDetectionTechnologyofGroupBStreptococcalInfectioninPregnantWomenAbstract[Background]GroupBStreptococcus(GBS)weregrampositivecocci,istheprimarypath

7、ogenperinatalandneonatalinfectiondisease.GBSaccordingtothespecificityofthetypecanbedividedintoatleast10serotypes,anyserotypecancauseearlyonsetofGBSinfection.Studieshavefoundthat,GBSalsocancauseurinarytractinfections,chorioamnionitis,postpartumendometritis,woundinfection,p