大珠母贝cct-α、cct-β和cct-η亚基基因全长cdna的克隆及其冷应激表达

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1、分类号*Q785密级：公开UDCs577学号：2111201129东海洋太嗲硕学位论文义..大珠母贝CCT-a、CCT-p和CCT-ii亚基基因全长cDNA的克隆及其冷应激表达;.、.•一d•‘乂毛艾涛指导教师:*^串请学位类别:■",、->专业名称:称：水产养殖研究方向：水产经济动物繁殖生物学向:学院名称:t(*;»—中国•湛江2015年6月嗲像铪弍答辦奏風会极成主席：委员為以表导师:裒令t时间：严夕+奸i弘S广东海洋大¥学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研宄所取得的研宄成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其

2、他个人或集体己经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担a作者签名：各艾5务；年6月丨曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权广东海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于1、保密□，在______年解密后适用本授权书。2、不保密0。(请在以上相应方框内打“V”）作

3、者签名：年4月^曰导师签名：L■年6月>曰大珠母贝CCT-α、CCT-β和CCT-η亚基基因全长cDNA的克隆及其冷应激表达摘要大珠母贝是生产大型海水珍珠的重要母贝，对海水温度的要求严格，生活的适温范围是25～30℃，不耐低温,了解大珠母贝对环境低温的反应机制有重要意义。本研究首次克隆到大珠母贝冷应激相关基因CCT-α、CCT-β和CCT-η基因cDNA序列全长，并对其在不同组织和急性冷应激下的表达模式进行了分析，以了解大珠母贝的低温反应机制，也为大珠母贝的耐寒性状选育工作提供参考。结果如下：1.大珠母贝CCT-α、CCT-β和CCT-η基因cDNA全长克隆和生物信息

4、学分析利用RACE技术首次从大珠母贝中克隆获得CCT-α、CCT-β和CCT-η基因cDNA全长。CCT-α基因cDNA全长1803bp，开放阅读框为1608bp，编码535个氨基酸，在赤道结构域比其他物种少20个氨基酸，具有3个CCT家族蛋白签名序列：36KSSLGPVGLDKML48、57ITNDGATILKLLEVEHP73、85QDQEVGDGT94，包含三个保守的功能结构域：赤道结构域、顶端结构域和中间结构域，含有9个保守的ATP结合位点分别位于39-41、91、95、137、377、395、434、486和488位氨基酸残基处，6个蛋白质结合位点分别位于第

5、1-3、256、457-461、463、525、527-535氨基酸残基处；大珠母贝CCT-α与海蜗牛（Aplysiacalifornica）、斑马鱼（Daniorerio）、人类（Homosapiens）CCT-α推导的氨基酸序列同源性分别为80.7%、77.1%、75.4%。获得CCT-β基因两个转录本，分别长1829bp和2289bp，含有相同的5’末端非编码区105bp，3’末端非编码区分别长591bp和131bp，两个转录本开放阅读框均为1593bp，编码530个氨基酸，具有3个CCT家族蛋白签名序列：38KSTLGPKGMDKIL50、58VTNDGATI

6、LKSIGIVNP74、86QDDEVGDGT95，包含三个保守的功能结构域：赤道结构域、顶端结构域和中间结构域，含有9个保守的ATP结合位点分别位于42-44、92、96、160、387、405、445、488和490位氨基酸残基处，含有一个DEADbox基序：377ILDEADRSL385，3个蛋白质结合位点分别位于第1-4、467、526-530氨基酸残基处；大珠母贝CCT-β与牡蛎（Crassostreagigas）、斑马鱼（Daniorerio）、人类（Homosapiens）CCT-β推导氨基酸序列同源性分别是90.4%、76.8%、75.8%。ICCT-

7、η基因cDNA全长1895bp，开放阅读框为1895bp，编码543个氨基酸，CCT-η具有3个CCT家族蛋白签名序列：37RTTLGPRGMDKLI49、58ISNDGATILKTLDIVHP74、86QDAEVGDGT94，包含三个保守的功能结构域：赤道结构域、顶端结构域和中间结构域，含有9个保守的ATP结合位点分别位于40-42、92、96、161、391、409、449、492和494位氨基酸残基处，3个蛋白质结合位点分别位于第1-4、250、543氨基酸残基处；大珠母贝CCT-η与牡蛎（Crassostreagigas）、海蜗牛（Aplys