长链非编码rna meg3在胰腺癌发生发展中作用的实验研究

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1、、考SOOCHOWUNIVERSITY硕士专业学位论文论文题目长链非编码RNAMEG3在胰腺癌发生发展____________中作用的实验研究________________研究生姓名____________________陈瑞东指导教师姓名_____________唐文__________________专业名称消化系病学研究方向____________________胰腺癌___________论文提交日期2015年5月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外y本论文

2、不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得办州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体2均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名匕jn今+•日期：-苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即；学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被

3、查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文y可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在_____年__月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名s日期：>m导师签名=日期2长链非编码RNAMEG3在胰腺癌发生发展中作用的实验研究中文摘要长链非编码RNAMEG3在胰腺癌发生发展中作用的实验研究中文摘要研究目的：研究人类长链非编码RNAMEG3（Maternallyexpressedgene3）在胰腺癌发生发展过程中的作用。方法：通过全基因合成的方法人工合成MEG3基因全长，构建pcDNA3.0-MEG3重组质

4、粒。将上述重组质粒导入人胰腺导管细胞癌SW1990细胞，转染后细胞记为MEG3-SW1990，采用RT-PCR及荧光定量PCR检测MEG3在转染前后细胞中mRNA的表达，采用MTT法及平板克隆实验检测转染前后细胞的增殖效率，采用transwell迁移实验及Matrigel侵袭实验检测转染前后细胞的迁移及侵袭功能的变化，采用流式细胞仪法检测转染前后细胞的凋亡率的变化，采用Western-Blot法检测转染前后细胞中p53蛋白的表达水平的改变。使用含5-氮杂-2-脱氧胞苷的培养基培养SW1990细胞，RT-PCR检测经处理的细胞中MEG3mRNA的表达水平的变化。结果

5、：RT-PCR及荧光定量PCR检测发现在SW1990细胞中几乎无MEG3mRNA的表达，而在MEG3-SW1990细胞中MEG3mRNA的表达明显增高。MTT及平板克隆实验表明MEG3-SW1990细胞的增殖效率较SW1990细胞明显降低。通过transwell迁移实验及Matrigel侵袭实验发现MEG3-SW1990细胞的迁移能力及侵袭能力较SW1990细胞无明显差异。经流式细胞仪检测，MEG3-SW1990细胞较SW1990细胞的凋亡率增加。Western-Blot检测表明MEG3-SW1990细胞中p53的表达量较SW1990细胞上升。经5-氮杂-2-脱氧

6、胞苷处理后，SW1990细胞中的MEG3mRNA的表达水平较之前明显上升。结论：SW1990细胞在转染MEG3基因后，其细胞增殖能力受到了明显抑制，且更易凋亡，该现象可能与MEG3促进p53的表达相关。而MEG3基因可能对SW1990细胞的迁移、侵袭能力无明显影响。DNA序列的超甲基化参与导致了胰腺癌细胞中MEG3基因表达的缺失。关键词：长链非编码RNA，MEG3，胰腺癌，质粒作者：陈瑞东指导老师：唐文I英文摘要长链非编码RNAMEG3在胰腺癌发生发展中作用的实验研究THEROLEOFMEG3-MEDIATEDGENERATIONANDDEVELOPMENTOFP

7、ANCREATICCARCINOMAAbstractObject:ToexploretheeffectoflongnoncodingRNAMEG3onpancreaticcarcinoma,andtostudyitsmolecularmechanisms.Methods:TheSW1990humanpancreaticcarcinomacellswereinfectedbyplasmidpcDNA3.0-MEG3,then,usingreal-timePCRtoidentifiedthegene’sexpressioninSW1990.TheeffectofMEG

8、3onpr