植酸酶基因phya双t-dna表达载体构建及转化灵芝原生质体的研究

《植酸酶基因phya双t-dna表达载体构建及转化灵芝原生质体的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：Q5单位代码：10193密级：公开学号：2012227硕士学位论文植酸酶基因phyA双T-DNA表达载体构建及转化灵芝原生质体的研究ConstructionT-DNAbinaryVectorofphyAGeneandtransformationinGanodermalucidumprotoplasts作者姓名：李晰亮学位类别：理学硕士专业名称：生物化学与分子生物学研究方向：菌物生物反应器指导教师：李海燕教授所在学院：生命科学学院2015年5月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得

2、的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论

3、文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要植酸是一种植物性饲料中磷存在的主要形式，单胃动物的消

4、化系统中不含植酸酶，很难对植酸中所含的磷直接进行利用。植酸酶的开发和应用可以有效的解决这一问题。灵芝(Ganodermalucidum)是一种重要的食药用真菌，具有很强的生理活性和药理活性，作为一种极具利用价值的大型真菌，灵芝分子生物学层面的开发还没有形成完整的体系，有关其安全转化系统和高效表达系统的开发尚处于起步阶段。本文首次利用灵芝菌丝体作为生物反应器系统，建立了灵芝菌丝体共转化体系和高效表达体系；并首次利用真菌特异性启动子GPD和终止子NOS，构建真菌特异性双T-DNA表达载体pSB130NG；成功克隆了植酸酶基因phy

5、A，并将其亚克隆于载体pSB130NG上，通过农杆菌转化法对灵芝原生质体成功进行了转化，获得了转植酸酶基因灵芝菌丝体。具体研究结果如下：1.利用真菌特异性启动子GPD基因及终止子NOS基因，分别选用单酶切位点PstI及双酶切位点SacI和EcoRI，成功构建真菌通用双T-DNA载体pSB130NG。2.成功克隆植酸酶基因phyA，选用单酶切位点XbaI，将其成功构建到真菌通用双T-DNA载体pSB130NG上，构建pSB130NG-phyA重组质粒。3.利用溶壁酶提取灵芝原生质体，并用FDA染色法检测灵芝原生质体活性，原生质体

6、成活率为90％，大小均一，形状正常。4.成功将构建好的重组质粒pSB130NG-phyA转入农杆菌EHA105中，利用农杆菌转介导法对灵芝原生质体进行转化，将植酸酶基因phyA转化到灵芝原生质体中。5.转化后的灵芝原生质体在含有潮霉素抗性的MYG培养基上进行再生培养，获得了转植酸酶基因phyA灵芝菌丝体，转化效率为2个转化子/107个原生质体。关键词：灵芝，植酸酶基因，双T-DNA载体IABSTRACTPhyticacidisthemainformofphosphorusexistsinplantfeed.Becausethe

7、digestivesystemofmono-gastricanimaldoesnotcontainphytase,soitisverydifficulttousephytatephosphorusdirectly.Thedevelopmentandapplicationofphytasecouldsolvethisproblemseffectively.Ganodermaisanimportantedibleandmedicinalfungus,ithasastrongphysiologicalactivityandpharm

8、acologicalactivity.Asalargefungus,ithasaveryhighvalue.However,thedevelopmentofGanodermainmolecularbiologylevelhasnotyetformedasaperfectsys