植酸酶基因phya转化大豆及转基因新材料创制

《植酸酶基因phya转化大豆及转基因新材料创制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北农业大学硕士学位论文植酸酶基因phyA转化大豆及转基因新材料创制姓名：闫瑞叶申请学位级别：硕士专业：作物遗传育种指导教师：张彩英；马峙英20120524／摘要土壤磷多以有机态形式存在，其中植酸磷占50％以上，分解利用植酸态磷是提高土壤磷利用效率、改善植物磷营养的重要途径。植酸酶可有效水解土壤中的植酸态磷，释放出无机磷酸及其盐类，提高植物对土壤中有机磷的利用率。本研究以无花果曲霉中的植酸酶phyA为转化基因，通过构建表达载体，转化不同大豆品种，获得了转基因新材料。具体研究结果如下：1．采用农杆菌介导技术将phyA基因分别

2、转化大豆品种冀豆12和冀豆16，获得了转基因新材料。其中，冀豆12T0代阳性植株30株、T1代58株(8个株系)、Tz代23株(3个株系)、T3代2株(1个株系)，并已收获T4代种子；冀豆16To代阳性植株1株、T1代5株、T2代1株，并已收获T3代种子。2．采用花粉管通道转化技术将phyA线性片段转化大豆品种冀豆12和五星1号，获得了阳性材料。其中，冀豆12T0代植株58株、T1代28株(9个株系)、T2代19株(5个株系)、T3代17株(4个株系)、T4代5株(1个株系)；五星1号T0代14株、T1代1株，并已收获T2

3、代种子。同时，采用该技术将载体phyA转入冀豆12和五星1号，分别获得冀豆12T0代植株65株，五星1号T0代5株，并已收获Tl代种子。3．构建phyA的无标记(Marker-free)表达载体pX6-phyA，经农杆菌介导子叶节技术转化大豆品种郑92116，获得T0代阳性植株2株；经花粉管通道技术转入五星2号，获得To代阳性植株3株。4．分析了转phyA大豆新材料在植酸磷条件下根系分泌植酸酶活性。3个转基因株系在植酸磷处理下根系分泌植酸酶活性分别比野生型大豆提高5％、13％和24％。其中，2号和3号株系与野生型大豆差异分

4、别达到0．05和O．01显著水平。5．通过分析转phyA大豆新材料根际周围土壤微生物含量发现，在幼苗期、开花期和结荚期，转phyA大豆新材料的根际周围土壤微生物(真菌、细菌和放线菌)含量与野生型对照没有明显差异，说明phyA的转入并未影响大豆植株根际周围的土壤微生物含量。关键词：大豆；植酸酶；农杆菌介导；花粉管通道技术；转基因材料Innovationoftransgenicybean(Glj"transasoyDeanGIvcinemax．¨．LllineswithphytasephyAAuthor：YahRui-yeMa

5、jor：CropGeneticandBreedingSupervisor：Prof．ZhangCai—yingProLMaZhi·yingAbstractOrganicphosphorus(Po)isthemainformsofphosphorusinsoil，ofwhichthephytateaccountedformorethan50％．PhytaseisaspecialclassofphosphataseswhichcatalyzethesequentialhydrolysisofphyticacidtOproduc

6、elessphosphorylatedmyo—inositolderivativesandinorganinphosphate．SoitisimportanttocloneandutilizethephytasegenetohydrolyzephytateandreleasePiforplant．IntMsstudy,wetransformedaphytasegenephyAintodifferentvarietiestoobtainnewsoybeangermplasmsthataccumulatesignificant

7、quantitiesofactivephytaseintherhizosphereofrootstoimprovethecapabilityofthetransgenicplanttoacquiresoilEThemainresultswereasfollows：1．PhytasegenephyAwasintroducedintoJi-dou12andJi-dou16byAgrobacterium-mediatedsystem．Total30To，58T1(eightlines)，23T2(threelines)andtw

8、oT3(oneline)PCRpositiveplantswereobtainedinJi—dou12．TotaloneTo，fiveT1andoneT2PCRpositiveplantswereobtainedinJi-dou16．2．Avectorbackbone‘freeandselectable