重度子痫前期胎盘外泌体影响滋养细胞及内皮细胞功能的初步研究

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1、乘兩大？參硕±学位论文重度子病前期胎盘外證体影响滋养细胞及内皮细胞功能的初步研究专业名瓶妇产科研究生姓名：李玉静导师姓名：巧她莉本论文获国家自然科学基金项目（８１３７０７２４）资助。ＰＩ泣ｃｅｎｔ过１ｅｘｏｓｏｍｅｓｆｒｏｍｓｅｖｅｒｅｒｃｅｃｌ过ｍｓｉ过ｐｐａｔｉｅｎｔｓｄｉｓｒｅｕｌａｔｉｎｔｒｏｈｏｂｌａｓｔｓｐｇｇｐａｎｄｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｆｕｎｃｔｉｏｎＡＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＳｕｂｍｉｔｅｄ化ＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒ

2、ｓｉｔｙＦｏｒｔｈｅＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＭａ２０１５ｙ东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外论文中不包含其他人已经发，表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究

3、所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。．这＾吏曰期．ｏｇ：刘ｙ研究生签名：东南大学学位论文使用巧巧声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可Ｗ采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文培的内一容和纸质论文的内容相致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被査阅和借阅，可Ｗ公布（包括Ｗ电子信息形式刊登）论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布（包括电子信息形式刊登）授权东甫大学研究生院办理。祝究生签名：导师签

4、名：巧！巧树＿中文摘要重度子痛前期胎盘外泌体影响滋养细胞及内皮细胞功能的巧步研究中文巧要：李玉静研究生．导师：胡姪莉教巧．东南大学医学院【研究目的】ｅ－ｅｃ子病前期（Ｐｒｌａｍｐｓｉａ，化）是妊娠期特有的并发症。表现在妊娠２０周Ｗ后出现裔血压、蛋白尿及全身多器官功能损害。胎盘子宫螺旋小动脉重塑不足是ＰＥ的重要病理改变，此与绒毛外滋养细胞功能有密切关系；而全身血管痊李造成的商血压则与血一管内皮损伤及功能奈乱相关。近年，Ｒｅｄｍａｎ提出ＰＥ发病的两阶段理论，即第阶段在

5、子宫脂盘局部，第二阶段全身症状出现。研究ＰＥ子宮胎盘局部变化引起全身血管病生理变化的过程成为热点一。外泌体是稳定存在于细胞外的种微型巧泡，可将ｍｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、蛋白质等生物活性分子包裹在内，运送到鞭细胞从而影响铅细胞生物学功能。近来研究发现，胎盘可分泌外泌体到母体循环，调控母体全身器官的功能改变，Ｗ适应一妊娠的需求，如若这过程发生异常，则会导致妊娠寒病的发生。本研究通过分离ＰＥ－患者和正常孕妇血清中胎盘外泌体，检测其对ＨＴＲ８／ＳＶｎｅｏ绒毛外滋养细胞炎症通路，Ｗ及对人原代胳静脉内皮细胞调亡Ｓ

6、激活、增殖功能、血管舒缩相关西子ｅＮＯ表达的影响，探讨胎盘分泌的外泌体在ＰＥ发病中的作用。［研究方法】’－８０Ｃ的重度ＰＥ病人血清及５取储存于，每份样品取２００同期正常孕妇血清各１例叫，通过廉糖密度梯度离必联合两次ＰＥＧ６０００沉淀分离胎盘外泌体，ＰＢＳ重悬浮，ＢＣＡ试剂盒对外泌体进行蛋白定量，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析各层ＣＤ６３、ＣＤ８１等外泌体标志分子及胎盘外泌体特有标记蛋白分子ＰＬＡＰ的表达情况，同时表达ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＰＬＡＰ的密度层即可认为是胎盘外泌体所在密度层－。ＰＫＨ６７染

7、色胎盘外泌体后分别与ＨＴＲ８／ＳＶｎｅｏ－细胞和ＨＵＶＥＣ细胞共解育化，巧光显微镜观察ＨＴＲ８／ＳＶｎｅｏ细胞和ＨＵＶＥＣ细胞对外泌体的摄入情况－８。采用ＣＣＫ试剂检测重度ＰＥ患者血清及同期正常孕妇血清分离的胎盘外泌体对ＨＴＲ－８／ＳＶｎｅｏ细胞増殖的影响，通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和ｑＰＣＲ检测ＰＥ胎盘Ｉ东南大学硕±学位论文－－－－８外泌体对ＨＴ艮／ＳＶｎｅｏ细胞ＮＦＫＢｐ６５炎症信号通路关键分子（ＰＰ６５、ＭｙＤ８８、正６）Ｐｔｕｓ表达的影响。利用ＣｅｌｌＤｅａｔｈＤｅｔ

8、ｅｃｔｉｏｎＥＬＩＳＡ试剂检测ＰＥ胎盘外泌体对ＨＵＶＥＣ细一胞调亡情况ｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法ＰＥＨＵＶＥＣ细胞内皮型。运用Ｗ检测胎盘外泌体对氧化氮合酶ｅＮＯＳ表达的影响。【研究结果】￣１．薦糖密度梯度离也后，Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ发现ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＰＬＡＰ同时表达于２１％３４％