fas、bcl2蛋白在重度子痫前期胎盘滋养叶细胞凋亡的实验研究

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1、Fas、Bcl2蛋白在重度子痫前期胎盘滋养叶细胞凋亡的实验研究作者：刘颖新,李琪佳,程曼,袁鸿,冯雪梅,陈玲单位：071051河北省保定市第二医院妇科(刘颖新、袁鸿、冯雪梅、陈玲玲)；华北煤炭医学院病理教研室(李琪佳)；河北省保定市钞票纸厂职工医院妇科(程曼)【摘要】目的探讨凋亡相关蛋白Fas、Bcl2在胎盘滋养叶细胞中的表达及其意义，滋养叶细胞凋亡与Fas、Bcl2两种蛋白的关系，从而于细胞凋亡的角度探讨重度子痫前期的发病机制。方法用免疫组织化学SP法检测重度子痫前期患者54例(试验组)，同时选择同期正常晚孕妇女20例(对

2、照组)做胎盘组织中Fas、Bcl2蛋白的表达及滋养叶细胞凋亡检测。结果细胞凋亡相关蛋白Bcl2、Fas在重度子痫前期及正常孕妇胎盘组织中均有表达。其中Bcl2蛋白的表达在试验组低于对照组(P<0.05)；而Fas蛋白的表达在试验组明显高于对照组(P<0.05)；在试验组及对照组均可观察到细胞凋亡现象,在滋养层细胞(合体细胞滋养层及细胞滋养层)、间质细胞、血管内皮细胞胞浆及细胞核内均有表达，尤以合体细胞最多见。试验组细胞凋亡较对照组明显增多(P<0.05)。重度子痫前期时,Bcl2与Fas蛋白的表达呈负性相

3、关;Bcl2蛋白表达与胎盘细胞凋亡呈负性相关，而Fas蛋白的表达与胎盘细胞凋亡呈正性相关(P＜0.01)。结论重度子痫前期的发病原因可能与胎盘滋养叶细胞凋亡及Bcl2、Fas基因异常表达有关。【关键词】重度子痫前期；胎盘滋养叶细胞；细胞凋亡；Bcl2；Fas重度子痫前期是一种严重的妊娠并发症，是导致妊娠期母婴发病率及病死率上升的重要原因之一。本文拟从胎盘滋养叶细胞入手，观察重度子痫前期胎盘的病理变化及其中细胞凋亡现象，并与正常胎盘组织作对比，探讨凋亡相关蛋白Fas、Bcl2在胎盘滋养叶细胞中的表达及其意义，滋养叶细胞凋亡与

4、Fas、Bcl2两种蛋白的关系，从而从细胞凋亡的角度探讨重度子痫前期的发病机制并指导临床治疗。1材料与方法1.1一般资料收集河北省保定市第二医院2004年10月至2006年10月间住院的重度子痫前期患者共54例(试验组)，孕妇平均年龄(28.2±2.5)岁，平均孕周(36.7±3.6)周；同时选择同期正常晚孕妇女20例(对照组)，平均年龄(26.2±4.0)岁，平均孕周(38.8±2.0)周。20例健康对照组病例为足月产孕妇，均无妊娠合并症及内外科合并症。所有病例均为单胎妊

5、娠及选择性剖宫产。胎盘娩出后，立即从胎盘母面随机选取2块2cm×2cm×1cm胎盘组织。放入40g/L甲醛溶液中固定。石蜡包埋组织，每一组织块连续切片，每张厚度约4～5μm。行常规HE染色外，其余分别行细胞凋亡及免疫组化染色。1.2细胞凋亡(TUNEL)检测(1)试剂：TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(北京中杉公司)，鼠抗人Fas、Bcl2单克隆抗体(福州迈新公司)，即用型EnVision免疫组化试剂盒(福州迈新公司)。(2)结果判定：用TUNEL法标记过氧化物酶显色检测细胞凋亡，阳性细胞(凋亡细胞)呈

6、棕褐色，核浓缩，边集，大小不等，有时呈半月形，有时核碎裂成碎片。最终胞质也发生碎裂。(3)凋亡指数的计算：每张切片连续选取5个高倍(×200)视野，计算平均凋亡细胞所占细胞总数的百分比即为凋亡指数(apoptosisindex，AI)=凋亡细胞数/细胞总数×100%1.3免疫组织化学染色结果判定及图像分析Fas、Bcl2免疫组化染色后，阳性信号呈黄褐色，位于胞浆。采用CMIAS真彩色医学图象分析系统(北京航空航天大学)对各组免疫组化结果进行平均光密度(opticaldensity,OD)检测及分析。每张切

7、片随机选取5个高倍视野(×200)，对其中一个具有代表意义阳性结果视野的棕黄色颗粒进行标记，以此标准自动检测所有视野的阳性结果。以参数平均积分光密度代表蛋白的颗粒密度。1.4统计学分析采用SPSS13.0统计分析软件进行处理，计量资料以±s表示；组间均数比较采用t检验，将各项指标OD进行相关性分析。P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1病理形态改变2.1.1肉眼检查：重度子痫前期时胎盘母面组织均可见到散在分布的钙化灶,质地硬,触之有砂粒感,或可见到灰白色的类纤维瘢痕灶，与周围组织界限清楚。有时

8、还可见到陈旧性血肿形成，棕黑色、大小不等。2.1.2镜下观察：对照组胎盘绒毛血管表现为妊娠期生理性改变，血管内皮细胞被内皮样滋养细胞取代，细胞大、胞浆丰富。血管壁中层平滑肌和弹力纤维消失，而被无收缩功能的纤维蛋白样物质取代。血管腔增大、管壁变薄。而