拟穴青蟹阳离子非依赖6-磷酸甘露糖受体（spci-mpr）基因的克隆和功能研究

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1、学校代码：10264研究生学号：M120110200上海海洋大学硕士学位论文题目：拟穴青蟹阳离子非依赖6-磷酸甘露糖受体(SpCI-MPR)基因的克隆和功能研究英文题目：CloningandCharacterizationofSpCI-MPRgeneinMudCrab专业：生物学研究方向：生化与分子生物学姓名：刘月星指导教师：马凌波研究员二0一五年六月ThesisSubmittedtoShanghaiOceanUniversityfortheMasterDegreeofBiologyCLONINGANDCHARACTERIZATIONOFSPCI-MPRGENEINMUDCRAB

2、byLIUYue-xingDissertationSupervisor:ResearcherMALing-boCollegeofFisheriesandLifeScienceShanghaiOceanUniversityShanghai,P.R.ChinaJune,2015上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果

3、由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注李胜中科院植物生理生态研究所研究员主席王群华东师范大学教授委员鲍宝龙上

4、海海洋大学教授委员马春艳中国水科院东海水产研究所副研究员秘书答辩地点中国水科院东海水产研究所答辩日期2015年6月2日摘要拟穴青蟹阳离子非依赖6-磷酸甘露糖受体(SpCI-MPR)基因的克隆和功能研究摘要阳离子非依赖6-磷酸甘露糖受体(cation-independentmannose-6-phosphatereceptor,CI-MPR)又称胰岛素样生长因子II受体(Insulin-likegrowthfactor-IIreceptor,IGF2R)，隶属于P型凝结素家族，是一种多能细胞受体。然而，过去对CI-MPR的研究主要局限于脊椎动物，在甲壳动物中尚没有相关的研究报道。拟

5、穴青蟹(Scyllaparamamosain)是一种典型的甲壳动物，广泛分布于我国的东南沿海等地。近年来，对拟穴青蟹的研究已取得了一定成果。拟穴青蟹良好的研究背景为研究CI-MPR基因的功能奠定了基础。本研究以拟穴青蟹CI-MPR(以下称SpCI-MPR)基因为研究对象，主要研究内容和结果如下：1.获得拟穴青蟹CI-MPR基因的全长序列本研究在已知部分序列的基础上，利用RACE方法获得了拟穴青蟹SpCI-MPR基因的cDNA全长序列，序列已上传至GenBank(Accessionnumber:KM658157)。该序列长度为3931bp，编码1095个氨基酸。序列分析显示该基因编

6、码的蛋白含有7个保守的“MRH”结构域，每个结构域均含有保守的6-8个半胱氨酸，该结构为CI-MPR蛋白的特异保守结构域。对氨基酸序列进行BLASTP在进行同源性检索发现SpCI-MPR蛋白序列与其它动物的CI-MPR蛋白序列具有较高的同源性。基于CI-MPR蛋白氨基酸序列构建的系统进化树同物种进化关系保持一致。由此表明已成功克隆到拟穴青蟹SpCI-MPR基因的cDNA全长序列。2.生物信息学方法对SpCI-MPR基因进行功能和特征分析该蛋白存在大量的糖基化和磷酸化位点。在SpCI-MPR蛋白的7个结构域中，结构域5和结构域6同哺乳动物的结构域3和结构域9拥有较高的同源性，推测两

7、个结构域在磷酸甘露糖(mannose6-phosphate,Man-6-P)结合时发挥着重要的作用。同时，基于结构比对的分析发现，SpCI-MPR蛋白缺少与IGF-II结构位点相关的疏水基团和必须氨基酸，由此推测拟穴青蟹的SpCI-MPR蛋白不具有调控IGF-II的功能。I摘要3.对SpCI-MPR基因进行时空表达分析为研究SpCI-MPR基因对拟穴青蟹生长和早期发育的影响，本文检测了其在拟穴青蟹从刚出生后的蚤状幼体I期(ZoeaI,Z1)、蚤状幼体II期(ZoeaII,Z2)、