拟穴青蟹胺氧化酶基因的功能研究.pdf

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1、上海海洋大学硕士学位论文学校代码：10264研究生学号：M150110170上海海洋大学硕士学位论文题目：拟穴青蟹胺氧化酶基因的功能研究英文题目：FunctionalstudyofamineoxidasegenefromScyllaparamamosain专业：生物学研究方向：水生生物功能基因姓名：刘俊果指导教师：蒋科技副研究员二O一八年五月十九日I上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内

2、容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单

3、姓名工作单位职称备注赵金良上海海洋大学教授主席马凌波水科院东海水产研究所研究员委员宋炜水科院东海水产研究所副研究员委员委员委员赵明水科院东海水产研究所研究实习员秘书东海所6号楼3楼会议答辩答辩地点2018.5.19室日期上海海洋大学硕士学位论文拟穴青蟹胺氧化酶基因的功能研究摘要胺氧化酶（amineoxidase）主要参与生物体内胺类物质的代谢过程，对维持生物体的神经传导、新陈代谢和细胞的生长分化等具有重要的调节作用。常见的胺氧化酶有以醌为辅因子的含铜的二胺氧化酶和伯胺氧化酶，以黄素为辅因子的单胺氧化酶；多胺氧化酶有乙酰多胺氧化酶和精胺氧化酶。单胺氧化酶（monoamineoxidase

4、,MAO）广泛存在于生物机体各组织中，主要分布于中枢神经系统和周围神经组织的线粒体外膜及突触前膜，是一种黄素蛋白酶。基于对底物和抑制剂的选择性和敏感性的差异，MAO被分为MAO-A和MAO-B两种亚型，并由位于X染色体上的不同的基因编码。MAO-A对5-羟色胺、去甲肾上腺素和多巴胺具有高亲和力，并且可被氯吉兰特异性抑制；MAO-B对底物苯乙胺、苄胺和色胺具有较强的亲和力，并可被司来吉兰所抑制。此外，有大量研究表明，MAO与哺乳动物的攻击性行为和人类的反社会行为密切相关。精胺氧化酶（spermineoxidase，SMO）作为一种近期被发现的多胺氧化酶，能够不经过乙酰化的过程直接氧化分解

5、精胺产生亚精胺、苯基丙醛和活性氧H2O2。多胺通过与细胞内的核酸物质、受体蛋白以及胞膜上的识别分子结合，对细胞的增殖、分化和凋亡起到调节的作用。近期SMO研究的热点集中在其介导的I上海海洋大学硕士学位论文炎症反应与肿瘤之间的关系。拟穴青蟹（Scyllaparamamosain）多分布于热带或亚热带的近海河口区域，是我国重要的海水养殖经济蟹类。本研究拟穴青蟹为研究对象，并成功构建了拟穴青蟹的cDNA文库，然后利用RACE技术克隆出目的基因的cDNA序列全长，进行生物信息学分析。选择单胺氧化酶典型抑制剂槲皮素处理实验蟹，利用实时定量PCR技术对拟穴青蟹胺氧化酶基因在不同浓度槲皮素抑制下的表

6、达模式。构建拟穴青蟹pCold-Ⅰ-SpAMO重组表达质粒，使之在表达菌株大肠杆菌中高效表达，最后对得到的重组蛋白进行功能验证。现对本文主要研究结果总结如下：1.通过RACE法成功克隆得到了拟穴青蟹的胺氧化酶基因的cDNA序列全长，综合分析后命名为：SpAMO。NCBI在线比对结果显示其与其他物种的SMO基因拥有较高的相似性。SpAMO基因cDNA全长为2599bp，它包含一个1521bp的开放阅读框（ORF）,一个26bp的5’-末端非编码区域,一个1052bp的3’-末端非编码区域，共编码了506个氨基酸。氨基酸序列的前26个残基为信号肽区域，在poly-A上游11bp处发现了一个

7、多聚的腺苷酸信号(AATAAA)，此为终止信号；在SpAMO基因的3’-UTR区域发现了多个与转录稳定性相关的ATTTA(G)基序。预测的蛋白分子量为56.96kDa，理论等电点5.04。SpAMO含有一个保守的FAD结合结构域，另外三个保守区域为PLN0568、YobN和proto_IX_ox。系统进化分析揭示拟穴青蟹SpAMO与SMO聚集在一起，并与昆虫形成无脊椎动物的一支。三级II上海海洋大学硕士学位论文结构预测结果显示SpAMO以家鼠过