冬凌草甲素抑制食管上皮细胞转化的分子机制研究

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1、学校代码10459学号或申请号201212262820密级公开郅州k%硕士学位论文冬凌草甲素抑制食管上皮细胞转化的分子机制研究作者姓名：徐京龙导师姓名：赵明耀教^受刘康採教授学科门类：医学专业名称：病理学与病理生理学培养院系：基础医学院完成时间：2015年5月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheMechanismResearchofOridoninSuppressingEsophagealEpithelialCellTransformationByJinglongXuSu

2、pervisor:Prof.MingyaoZhaoProf.KangdongLiuPathologyandPathophysiologyBasicMedicalCollege,ZhengzhouUniversityMay,2015学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研宄作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：WS年bnA日学位论文使用授权声明

3、本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定；同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位文作者：曰期：2(7'^年4月么日冬凌草甲素抑制食管上皮细胞转化的分子机制研究研究生徐京龙导师赵明耀教授刘康栋

4、教授郑州大学基础医学院病理生理学教研室中国郑州450001摘要目的食管癌(EsophagealCancer,EC)是常见的上消化道肿瘤。我国是世界上食管癌高发区之一，主要高发省份为河北、河南、福建和重庆，尤其在河北省磁县、河南省林州发病率和死亡率较高。食管癌的发生发展是一个长期的过程，食管癌的发生经历了食管鳞状上皮细胞轻、中度不典型增生，重度不典型增生到原位癌、食管鳞状细胞癌的过程。轻中度不典型增生是重度不典型增生之前的一个阶段，具有双向不稳定性，如对此阶段进行药物干预，阻止其向重度不典型增生及原位癌阶段发展，则能够达到预防食管鳞癌发生的目的。研究发现，

5、细胞内信号转导通路(Wnt、Notch、Ras/Raf/MEK/ERK、PI3K/Akt/mTOR)的激活对食管癌的发生、发展起到重要的作用。因此，针对信号通路中特定信号分子靶向作用可能为食管癌预防和治疗的新方法。冬凌草为唇形科香茶菜属植物，民间主要用来治疗咽喉肿痛、虫蛇咬伤和防治食管癌，冬凌草甲素为其主要抗肿瘤成分之一。临床实验证明，冬凌草能够明显缓解肿瘤症状，如食管癌、贲门癌、原发性肝癌和乳腺癌等，能够稳定和缩小肿瘤体积并且能够延长患者生命，对其抗肿瘤机制多集中于对肿瘤细胞的杀伤作用、诱导肿瘤细胞凋亡、增强其他抗肿瘤药物疗效等方面。但该化合物对食管早

6、期轻中度不典型增生是否有抑制作用并在食管癌的化学预防中发挥作用并不清楚。本研究以表皮生长因子(Epidermalgrowthfactor,EGF)诱导食管上I皮细胞转化为模型，探索冬凌草甲素对食管上皮细胞转化的抑制作用及其相应分子机制，以期为早期食管癌化学预防提供依据。材料与方法1．SHEE细胞毒性实验：检测不同浓度(DMSO、1、5、10、25、50和100μM)的冬凌草甲素对SHEE细胞的毒性作用，筛选出细胞增殖抑制实验的药物浓度。2．SHEE细胞的增殖抑制实验：根据细胞毒性实验结果筛选出的最大药物浓度为20μM，设置细胞增殖抑制实验药物浓度(DMS

7、O、1、2.5、5、10和20μM)，检测不同浓度冬凌草甲素在不同时间点(0h、24h、48h、72h和96h)对SHEE细胞的增殖抑制作用。3．软琼脂克隆形成实验：观察不同浓度(DMSO、EGF、1μM+EGF、2.5μM+EGF、5μM+EGF、10μM+EGF和20μM+EGF，EGF浓度为10ng/ml)的冬凌草甲素对EGF诱导的SHEE细胞转化能力的影响。4．磷酸蛋白激酶芯片检测：用DMSO、EGF(10ng/ml)、冬凌草甲素(20μM)+EGF(10ng/ml)处理细胞，通过磷酸蛋白激酶芯片，筛选出冬凌草甲素能够抑制EGF诱导的蛋白激酶。5

8、．蛋白印迹实验：验证磷酸蛋白激酶芯片结果，确定冬凌草甲素抑制EGF诱导的磷酸蛋白