luminex液相芯片同时检测小鼠3种病毒方法的建立

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1、－？ＭＺ分类号§１２４７３学ＵＤＣ密级棘媛叫义聲ＩＪＹＡＮＧＺＨＯＵＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ硕壬学侄冷文专业型）（Ｌｕｍｉｎｅｘ液相；Ｓ片同时检测小鼠３种病毒方法的建立刘春梅．薛眷风教受２２５００９指导教师姓名，扬州大学，江苏扬州，心＇上海２０１２０３高诫教授，，，上海实验动物巧究中申请学位级别：硕壬学科专业名称：兽医硕壬２０１５４：２０１５年６月论文提交日期：年月论文答辩日期扬州大学学位授予日期１５年６月：２０学位

2、授予单位：？答辩委员会主席：徐秀龙教授２０１５年６月＊学佐｛＾文Ｌｕｍｉｎｅｘ液相巧片同时检测小鼠３种病毒方法的建立Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆａｍｕｌｔｉｌｅｘｓｕｓｅｎｓｉｏｎａｒｒａｐｐｙｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅｋｉｎｄｓｏｆｍｉｃｅｖｉｒｕｓ研究生：刘春梅导师；薛整风教授高诚教授刘春梅；Ｌｕｍｉｎｅｘ液相总片同时检测小鼠３种病毒方法的建立ＩＬｕｍｉｎｅｘ液相巧片同时检测

3、小鼠３种病毒方法的建立中文摘要仙台病毒（ＳｅｎｄａｉｖｉｍｓＳｅＶ）属副黏病毒科，副黏病毒属，为单股负链ＲＮＡ病毒。，一ｅｃｃａｏｅｎｅｅＳｅＶ唯的自然宿主是咕齿类动物，ＳｅＶ为清洁级和ＳＰＦ（ＳｐｉｆｉｔｈｆｒＳＰＦ）级ｐｇ，实验小鼠的必须检测项目。小鼠巧炎病毒（Ｍｏｕｓｅｈｅｐａｔｉｔｉｓｖｉｍｓ，ＭＨＶ）是冠状病毒科，冠状病毒属的正链ＲＮＡ病毒，基因组不分节段。ＭＨＶ是清洁级小鼠必检项目。呼肠孤病毒３ｅｏｖ－型（Ｒｉｒａｓｔｙｐｅ３，Ｒｅｏ３）属于

4、呼肠孤病毒科，正呼肠孤病毒属，是双股ＲＮＡ病毒。一ｅｏ－ＰＦ级Ｒ３为Ｓ实验小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠的必检项目。实验动物旦上述感染病毒，。将干扰实验结果，影响科学研究的准确性目前，实验室诊断主要运用酶联免疫吸附试验（ＥＬ投Ａ）等血清学方法，也可通过病－毒分离方法检测。ＥＵＳＡ测抗体是检测病毒最常用的方法，但抗体在感染１２周后才能出现，因此ＥＬＩＳＡ不适合感染早期的诊断。聚合酶链式反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）和ＲＴ－ＰＣＲ是重要的分子生物

5、学检测方法、，具有简便快速的特点，己广泛应用于病毒学细菌学、寄生虫学检测中。Ｌｕｍｉｎｅｘ液相芯片技术是２０世纪９０年代兴起的新型检测技术，它集合了激光技术、流式细胞技术Ｗ及微球数字信号处理技术。与传统的临床检测方法相比，其主要优点在于高通量、高敏感、重复性高、检测范围广、反应速度快，仅需微量样品即可进行检测等。？？？Ｌｕｍ－抗ｉｎｅｘ具有两大核也技术：ｘＭＡＰ技术和ｘＴＡＧ技术。ｘＭＡＰ技术检测原理为抗原？体反应，，可用于蛋白质和核酸的检测；ｘＴＡＧ技术能够测定若干基因

6、组形式如基因表达分析（ｓｉｎｌｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｏｌｍｏｒｈｉｓｍＳＮＰ）分析定，微ＲＮＡ分析，单核昔酸多态性ｙ，特ｇｐｐ，序列的检测等。一立ｅｅｏ－目的种能快速检测小鼠ＳＶ、ＭＨＶ、Ｒ３３种。：：为建等病毒的方法方法－－ＰＣＲ技术和Ｌｕｍ联合使用ＲＴｉｎｅｘ液相基因巧片技术，针对ＳｅＶ、ＭＨＶ、Ｒｅｏ３的保守、１区域分别设计引物，通过聚合酶链式反应扩増获得大小为２６３ｂｐ５２ｂｐ和化Ｏｂｐ的目的一ａｎｔ－片段；对引物进行修饰，上游引物分别连接段特定的ＴＡＧ序列

7、（与微球上的ｉＴＡＧ－ＰＣ民反应反向互补），下游引物用生物素标记。利用修饰过的引物重新进行ＲＴ，产物与微扬州大学硕壬学位论文口球进斤杂交，建立小鼠３种病毒的液相基因忘片方法；并评价该方法的特异性、灵敏度。分别利用Ｌｕｍｉｎｅｘ液相基因忘片和ＥＬＩＳＡ对送检小鼠进行检测，对比两种方法的检出率。－、结果：建立的液相基因苍片检测方法能快速检测小鼠ＳｅＶＭＨＶ、Ｒｅｏ３等３种病毒，且该方法方便快速、特异性好、灵敏度高，病毒检出率优于ＥＬＩＳＡ。结论；成功建立了小鼠３种病

8、毒的液相忘片检测方法。关键词；Ｌｕｍｉｎｅｘ；液相芯片；检测；仙台病毒；小鼠肝炎病毒；呼肠孤病毒３型刘春梅＝Ｌｕｍｉｎｅｘ液相衣片同时检测小鼠３种病毒方法的建立口ＩＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆａｍｕｌｔｉｐｌｅｘｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎａｒｒａｙｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅｋｉｎｄｓｏｆｍｉｃｅｖｉｒｕｓＡｂｓｔｒａｃｔ－－ＳｅｎｄａｉｖｉｒｕｓＳｅＶ）ｉｓａｓｉｎｌｅｓｔｒａｎｄｅｄｎｅａｔｉ