虫媒病病原多重液相芯片检测方法的建立

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1、＇Ｍｉ？Ｓ；？ｉ？■？分类号Ｑ７８．＇学号２０１２２０７７■Ｆ山《爱老丈＃全曰制硕±学位论文虫媒病病原多重液相芯片检测方法的建立？？姓名：王晶指导教师：胡永婷副教授韩雪清研究员．．学科专业：生物化学与分子生物学培养单位：动物科技学院嗟笠．■單１１；中国？山西？太谷二０—五年六月．巧．，一：．‘ＳｈａｎｘｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＦ山－１ｔｉｍｅＭａｓｔ：ｅｒＤｅｒｅｅＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｇＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆａ

2、ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｌｉｕｉｄｃｈｉｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｑｐ－ｐａｔｈｏｇｅｎｓｏｆｉｎｓｅｃｔｂｏｒｎｅｄｉｓｅａｓｅｓＮａｍｅ：ＪｉｎｇＷａｎｇ－Ｓｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＶｉｃｅＰｒｏｆ．ＹｏｎｔｉｎＨｕｇｇＰｒｏｆ．ＸｕｅｉｎＨａｎｑｇＭａｏｒ：ＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｊｙｇｙＴｒａｉｎｉｎＵｎｉｔ：ＣｏｌｌｅｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄｇｇＶｅ化ｒｉｎａｒＭｅｄｉｃｉｎｅｙＴａｉｕＳｈａｎｘｉＣｈｉｎａｇＪｕｎｅ，

3、２０１５学位论文原倒性声明本人郑重声明：所提交的学位论文，是在导师指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文研究做出过重要贡献的个人和集体，均已在文中切明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。仪《作者签違（亲笔）：支觀年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定。即学位论文的知识产权属山西农业大学；同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的原件、复印件和电子版；允许论文被查阅和借

4、阅人授权山西农业大学可ｋ乂将学位论文的全部或部分内容编入有；本关数据库进行检索，可ｋ乂采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、疋编学位论文。作者签違（亲笔）：年月日导师签為。年月日（亲笔下少／＂本论文是在十二五科技支撑计划课题虫媒性外＂来动物疫病传播阻断技术研究（２０１３ＢＡＤ１２Ｂ０３）资助下完成目录１摘要铺综述２１虫媒病病原检测方法进展２１１２．西尼罗热１２水泡性口炎３．１．３裂谷热３１．４非洲猪痘３１５．莱姆病４１热４．６Ｑ１．７蓝舌病５１８５．施马伦贝格病

5、１９鹿流．行性出血热６１．１０埃博拉出血热６２液相芯片的介绍及应用７２．１液相返片原理７２．２液相芯片的特点８２１．３液相忘片的应用０前胃１３虫媒病病原液相芯片检测方法的研究１４１４１实验材料１１１．病毒及临床样品４１１４．２主要仪器及设备１．３实验试剂１４１．４主要试剂的配制１５２实验方法１６２．１引物和探针的设汁１６２．２引物和探针的稀释１６２．３虫媒病原ＤＮＡ／ＲＮＡ的提取１８２．４单重ＰＣＲ的扩増１９２．５ＰＣＲ扩増产物的检测、纯化及回收２０２

6、．６阳性质粒的构建２１２．７探针与微球的偶联２２２．８探针与微球的偶联效率２３２２．９杂交检测４２．１０不对称ＰＣＲ体系的建立及优化２５２．１１悬液芯片体系杂交条件的优化２５２．１２单重液相芯片和十重液相芯片检测体系的建立２６２．１３悬液芯片检测体系的验证特异性实验２６２．１４灵敏度实验２６２．１５重复性实验２６２．１６对临床样品的检测２６３结果２７３．１引物与探针的设计评价２７３．２单重ＰＣＲ扩增检测结果２７３．３特异性ＰＣＲ产物的质粒制备及鉴定３０３．４基因序列分析３０

7、３．５十种探针分别与十种微球偶联效率的验证３１３．６不对称ＰＣＲ扩増反应Ｆ／Ｒ比例的优化３５３．７液相检测ＰＣＲ产物模板量的优化３５３．８杂交反应中温度的优化％３．９杂交反应中时间的优化３７３．１０十重虫媒液相忘片检测体系的建立３８３．１１单重虫媒病原液相巧片检测扣３．１２多重虫媒病原液相芯片检测巧３．１３特异性试验３９３．１４灵敏度实验４０３．１５重复性实验４２３．１６对临床样品的检测４２４Ｗ论４３４．１引物与探针的分析是液相芯片的关键因素４３４．２核酸探针与微球有效偶联是液