四种重要生物恐怖毒素液相芯片多重检测方法的建立.pdf

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1、·154·2Q12生鲞笠期seFrontierHealthQuarantineJun．2012。V0l35．N0．3·实验研究与疾病监测．四种重要生物恐怖毒素液相芯片多重检测方法的建立徐华，顾大勇2胡春凌，李永进，史蕾，刘春晓，赵纯中，张妮奇，徐云庆，姜声扬1．南通大学公共卫生学院职业卫生与环境毒理学教研室，江苏南通226000；2．深圳出入境检验检疫局；3．深圳博睿祥晖生物技术有限公司；4．深圳博尔美生物科技有限公司摘要：目的建立包括蓖麻毒素B(RicintoxionB，RTB)、肉毒梭菌毒素A(Clostribotulinumto

2、xinA，CBTA)、金黄色葡萄球菌肠毒素B(StaphylococcalenterotoxinB，sEB)及产气荚膜毒素e(Clostridiumperfringenstoxin￡，CITe)在内的4种重要生物恐怖因子的多重液相芯片检测方法。方法采用双抗夹心法原理和液相芯片技术平台，通过优化偶联抗体浓度和检测抗体浓度以及抗原抗体最佳孵育时间，建立4种生物恐怖因子液相芯片多重检测方法。结果反应条件优化实验结果表明，RTB、CBTA、SEA和CPTe偶联抗体的最佳用量分别为20g、40g、8080P．g；RTB、CBTA、SEA和CPT

3、e检测抗体的最佳稀释比分别为1：5000、1：1000、1：2000、1：4000；4种毒素抗原抗体最佳孵育时间为6Omin。多重检测结果表明，本研究建立的毒素液相芯片多重检测方法可有效检测上述任意1种毒素、任意2种毒素组合、任意3种毒素组合并能同时检测4种毒素。灵敏度检测结果表明，RTB、CBTA、SEA、CPTe检测灵敏度分别为1ng／ml、10ng／ml、5ng／ml、10ng／ml。结论本研究建立的4种常见生物恐怖毒素液相芯片多重检测方法通过1次检测能同时检测RTB、CBTA、SEA、CPT8，是一种准确、灵敏、快速和高通量的

4、检测方法。关键词：蓖麻毒素B；肉毒梭菌毒素A；金黄色葡萄球菌肠毒素B；产气荚膜毒素e；液相芯片；生物恐怖；毒素；检测中图分类号：R446文献标识码：BEstablishmentofamultiplexluminex-baseddetectionmethodforfourkindsofimportantbiologicalterrorismtoxinsXUHua’，GUDa-yong，HUChun-ling，LIYong-jin，SHILei，LIUChun-xiao，ZHAOChun-zhong，ZHANGNi—qi，XUYun-qi

5、ng，JIANGSheng—yang’SchoolofPublicHealth，NantongUnivemity，Nantong,Jiangsu226000，China．Abstract：ObjectiveToestablishaluminex-basedmultiplexdetectionmethodforthesimuhaneousdetectionofRicintoxionB、ClostribotulinumtoxinA、StaphylococcalenterotoxiaB、Clostridiumpe~fringenstoxin

6、s．MethodsTheluminex-basedmultiplexdetectionwasinvestigatedonthedoubleantibodysandwichtheory．Throughoptimizingtheconcentrationofthecouplinganddetectionantibodyaswellastheincubationtimeofantigenandantibody，Aluminex—basedmultiplexdetectionmethodforfourimportantbiologicalte

7、rrorismtoxinswasestablishedeventually．ResultsOptimizationexperimentalresultsshowedthattheoptimumdosageforthecouplingantibodiesofRTB，CBTA，SEAandCPTewas20Ixg，40g，80g，80grespectively．TheoptimumdilutionratioofthedetectionantibodyofRTB，CBTA，SEAandCPTewas1：5000，1：1000，1：2000，

8、1：4000，respectively．Thebestincubationtimeoftheantigenandantibodywas60min．Muhipletestresultsindicatedthatthemul