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时间:2019-02-04
《马铃薯a病毒液相芯片快速检测方法的建立》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、中国农学通报2013,29(15):37-41ChineseAgriculturalScienceBulletin马铃薯A病毒液相芯片快速检测方法的建立121221刘洪义,张永江,刘忠梅,辛言言,李桂芬,张洪祥(1黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心,哈尔滨150001;2中国检验检疫科学研究院,北京100029)摘要:旨在建立可检测马铃薯A病毒(PotatovirusA,PVA)的液相芯片快速检测技术,用PrimerPremier5.0软件对GenBank中PVA核苷酸序列进行分析,设计其特异性探针并用生物素标记。探针偶联荧光编码微球后与PVA的PCR产物杂交反应,用液相芯片
2、检测仪检测荧光信号。结果显示该法具有较好的特异性,不与侵染马铃薯的番茄黑环病毒(Tomatoblackringvirus,TBRV)、马铃薯纺锤块茎类病毒(Potatospindletuberviroid,PSTVd)、马铃薯Y病毒(PotatovirusY,PVY)及番茄斑萎病毒(Tomatospottedwiltvirus,TSWV)反应;检测灵敏度约为10pg/μL总RNA。该方法可用于PVA的快速检测。关键词:马铃薯A病毒;液相芯片;病毒检测中图分类号:S412文献标志码:A论文编号:2012-2980PreliminaryDevelopmentofLiquichipDe
3、tectionTechniqueforRapidDetectionofPotatoVirusA121221LiuHongyi,ZhangYongjiang,LiuZhongmei,XinYanyan,LiGuifen,ZhangHongxiang(1TechnicalCenterofInspectionandQuarantine,HeilongjiangEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau,Harbin150001;2ChineseAcademyofInspectionandQuarantine,Beijing100029)Abstrac
4、t:TodevelopliquichipmethodfordetectingPotatovirusA(PVA),thenucleotidesequenceofPVAwasanalyzedbyusingthesoftwarePrimerPremier5.0,andspecificprobelabeledwithbiotinwaspreparedandcoupledwithfluorescence-codedmicrospheres,whichwasusedforhybridizationreactiontoRT-PCRproductsofPVA.Liquichipdetection
5、methodforPVAwasestablishedbyusingBio-RadLiquichiptodetectfluorescencesignalinthereactionsystem.Thespecificityofthismethodwasevaluatedbyapplyingtheproposedmethodtodetectfourvirusesinfectingpotato,TBRV,Potatospindletuberviroid(PSTVd),PotatovirusA(PVA)andTomatospottedwiltvirus(TSWV).Theresultsde
6、monstratedbetterspecificitytoPVAandnoreactionwithotherthreeviruses.Thesensitivityofthemethodwas1pg/μLoftotalRNA,whichwasequaltotheconventionalRT-PCRgelelectrophoresismethod.ThesuccessfuldetectionofPVAinpotatosamplesuggestedthefeasibilityofthisprocedureforroutinetesting.Keywords:PotatovirusA;L
7、iquichipdetectiontechnique;virusdetection0引言种薯进行严格检疫,该病毒传播扩散的可能性就非常马铃薯A病毒(PotatovirusA)是马铃薯Y病毒属大,具有较高的流行风险。因此该病毒具有非常高的[1-2](Potyvirus)的成员,侵染马铃薯后可造成40%以上的损检疫重要性,已被列入新修订的《中华人民共和国进失,和马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒混合侵染后,造成境植物检疫性有害生物名录》中。该病毒分布于日本、的损失更加严重,是马铃薯生产上危害
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