1,25-oh2d_3对ins-1胰岛细胞自噬功能的影响及其机制研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文论文题目1�25-(0H)7D,对INS-1胰岛细胞自噬功能的影响及其机制研究研究生姓名何大伟周正宇指导教师姓名细胞生物学专业名称人类疾病动物模型与比较医学研究方向论文提交日期苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下,独立进行研宄工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研宄成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研宄作出重要贡献的个人和集体，均已在文中

2、以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名:名辱』.期:苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以釆用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库

3、进行检索。涉密论文口本学位论文属在年一月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：也吹參_日期：导师$名：-1%^-_日期:^^1,25-(OH)2D3对INS-1胰岛细胞自噬功能的影响及其机制研究中文摘要中文摘要糖尿病（DiabetesMellius，DM）是由多种因素引起的以高血糖为特征的代谢性疾病。胰岛β细胞的功能异常和数量减少引起的胰岛素分泌不足是糖尿病发病的主要原因。1,25-(OH)2D3(VitD3)是维生素D的活性形式，通过与靶细胞上的维生素D受体（VitaminDreceptor，VDR）结合

4、，发挥其作用。自噬是进化上非常保守的过程，在正常条件下基础自噬主要是清除、降解细胞内受损的细胞器和长寿命蛋白，通过这种方式实现细胞器的自我更新，对维持细胞稳态具有重要的生物学意义。目的：1.探究维生素D对链脲菌素(Streptozotocin，STZ)所致INS-1细胞损伤的保护作用。2.探讨维生素D对胰岛细胞的分泌与自噬功能的调节作用及其机制。方法：培养具有大鼠胰岛β细胞生理特性的细胞株INS-1细胞，将INS-1细胞分为正-6-7-8常对照组和不同浓度的VitD3组（包括10mmol/L组、10mmol/L组

5、、10-9mmol/L组、10mmol/L组），作用24小时后，CCK8法检测各组细胞的增殖活性；ELISA测定不同浓度的VitD3对INS-1细胞胰岛素分泌的影响，确定VitD3对INS-1细胞作用的最适浓度。将INS-1细胞分为空白对照组(CON)、VitD3对照组(VitD3)、STZ损伤组(STZ)、VitD3预防组(VitD3+STZ)、VitD3治疗组（STZ+VitD3），各组作用结束后，CCK8法检测细胞增殖能力；收集培养液，ELISA测定各组细胞的胰岛素分泌情况；ELISA检测各组细胞上清液中丙

6、二醛（Malondialdehyde,MDA）的含量和细胞总抗氧化能力（Cellulartotalantioxidantcapacity,T-AOC）的水平；提取细胞总RNA和蛋白质，分别用RT-PCR和Western-Blot检测细胞自噬相关基因和蛋白的表达水平；收集各组细胞，制作超薄切片，应用透射电镜观察各组细胞中的自噬体和超微结构的变化。结果:1.VitD3对INS-1细胞分泌的影响-7与正常对照组相比，浓度为10mmol/L的VitD3显著促进了INS-1细胞的增III中文摘要1,25-(OH)2D3对I

7、NS-1胰岛细胞自噬功能的影响及其机制研究殖活性和胰岛素的分泌（P<0.01）。而其他浓度的VitD3组与对照组相比均无显著性差异（P>0.05）。2.VitD3对STZ所致INS-1细胞损伤的影响与正常对照组相比，STZ损伤组的细胞增殖活性、胰岛素分泌水平和T-AOC明显降低(P<0.001)，MDA含量升高（P<0.001）；VitD3预防组和治疗组的细胞增殖活性、胰岛素分泌和T-AOC水平也显著降低（P<0.01），MDA含量则显著升高（P<0.01）；与STZ损伤组相比，VitD3保护组和修复组的细胞增殖

8、活性、胰岛素分泌和T-AOC水平显著升高（P<0.01），MDA含量则显著降低（P<0.01）。3.VitD3对STZ损伤的INS-1细胞自噬功能的影响RT-PCR结果显示，与正常对照组相比，VitD3对照组、VitD3预防组和治疗组的自噬相关基因Beclin1、LC3的表达量明显升高（P<0.01）；Western-Blot结果亦显示同样的规律。透射电镜下观察，正常IN