靶向hbsag不同表位的双特异性抗体抗乙型肝炎病毒研究

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1、』IIIIIIIIIIIIIIrllllllllllllllllllllllllllllllll『Y2440703厣交通戈挚删8HANGHAIJlAOroNGUNlVERSfTY博士学位DOCTORALDISSERTATION论文题目靶向HBsAg不同表位的双特异性抗体抗乙型肝炎病毒研究学科专业作者姓名指导教师答辩日期免疫学谈文龙张雁云岁厣交通戈訾博士学位论文靶向HBsAg不同表位的双特异性抗体抗乙型肝炎病毒研究EffectiveHBV-NeutralizingActivitybyaBispecificAntibodyTargetingDistinctHBsAgEp

2、itopes研究生姓名：送塞垄学号：指导教师：堂雁云熬拯学科、专业：鱼疫堂研究方向：拉签坌掏复边能学位类型：登堂堂焦培养单位：土连塞通太堂医堂暄答辩日期：三Q二三生堕月上海交通大学2013届博士学位论文靶[h'JHBsAg不同表位的双特异性抗体抗乙型肝炎病毒研究姓名：学号：系所：专业：研究方向：资助基金：学位级别：导师：谈文龙0097109036医学院免疫学抗体结构与功能“973’’项目博士张雁云教授二O一三年四月ThesisforDoctorDegree，ShanghaiJiaoTongUniversityEffectiveHBV-NeutralizingActi

3、vitybyaBispecificAntibodyTargetingDistinctHBsAgEpitopesPh．DCandidate：Wen—longTanMajor：ImmunologyResearchField：AntibodyStructureandFunctionCollege：SchoolofMedicineAdvisor：Yan—yunZhangApr．2013上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作

4、品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：矽哆年多月多日上海交通大学博士学位论文学位论文版权使用授权书上海交通大学上海爻通大字学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。

5、(请在以上方框内打“√”)指导教师签名：曰期：』少I弓年4月9D日、女，晷，蕊日孙月签岁者年储净文Ⅲ敝山位期学日上海交通大学博士学位论文摘要乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)感染是全球范围的公共健康疾病。据统计，全球约有3．5亿人为慢性HBV携带者，而我国就占1．2亿。据统计，全球每年约有100万"--'150万人死于急性或慢性HBV感染导致的肝功能衰竭，肝硬化和肝癌。预防和治疗HBV感染迫在眉睫。目前针对HBV感染的治疗主要采用Q．干扰素和核苷酸类似物等药物抗病毒。长期使用疗效欠佳，易于导致病毒突变。接种乙型肝炎疫苗和乙肝免疫球蛋白(HBIG)

6、能有效减少HBV易感人群的发病率。因此，针对乙肝表面抗原(HepatitisBsurfaceAg，HBsAg)的抗体能有效地阻止HBV的感染。但以HBIG为基础的治疗性抗体来源的不确定性，低特异性和潜在的感染风险，制约着乙肝治疗性抗体在临床上的使用。由于单克隆抗体(Monoclonalantibody,mAb)具有长半衰期、低毒性、高亲和力、特异性好等多方面优点，所以开发乙肝特异性单克隆抗体越来越受到关注。我们采用超高速流式分选系统分离接种乙肝疫苗的志愿者外周血中HBsAg特异的记忆性B细胞(HBsAg+IgG+CDl9+)，并制备成单细胞样本。紧接着，采用Sing

7、leCellRT-PCR技术克隆每个样本中抗体相关的基因，体外重组表达相应的抗体。在我们的研究中，我们成功克隆了42株有活性的anti．HBsAg单克隆抗体，测定了其功能表位，亲和力以及测定单克隆抗体中和HBV活性。为了获得更好的中和HBV活性的抗体，我们选用了2株最好的anti．HBsAg单克隆抗体C4G4和D2H2研究其协同中和HBV的活性。体外实验研究表明：C4G4和D2H2双抗体联用可有效增强中和HBV的活性。鉴于双特异性抗体的诸多优点，我们在此基础上开发了这2株抗体的双特异性抗体C4D2．BsAb。在HepaRG细胞模型中，C4D2．BsAb显示出了比